课件：单基因遗传性疾病的分子诊断.ppt

School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * （二）杜氏肌营养不良症的分子诊断 多重PCR技术诊断DMD基因缺失 Chamberlain设计了9对引物，可同时扩增第4、8、12、17、19、44、45、48和51号外显子 Beggs设计了9对引物，可同时扩增启动子、第3、6、13、43、47、50、52和60号外显子 18对引物的多重PCR扩增可以检测出DMD基因的98%缺失患者 5’ 3’ Patients St (-) (+) 1 2 3 4 5 DMD GENE a g f b h c d e a b c d e f g h School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * 多重PCR诊断DMD基因外显子缺失 I：外显子45缺失 II：外显子48缺失 III：正常对照 多重探针连接扩增 Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) 测序： Sanger双脱氧链末端终止法 二代基因测序技术，如杂交测序法（SBH） School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * 血友病为一组遗传性凝血功能障碍的出血性疾病，其共同的特征是活性凝血活酶生成障碍，凝血时间延长，终身具有轻微创伤后出血倾向，重症患者没有明显外伤也可发生“自发性”出血。 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * 三、Ａ型血友病 1.血友病A（血友病甲），即因子Ⅷ促凝成分（Ⅷ：C）缺乏症，也称AGH缺乏症，是X染色体隐性遗传疾病。 2.血友病B（血友病乙），即因子Ⅸ缺乏症，又称PTC缺乏症、凝血活酶成分缺乏症，亦为X染色体隐性遗传。 3.血友病C（血友病丙），即因子Ⅺ（FⅪ）缺乏症，又称PTA缺乏症、凝血活酶前质缺乏症。为常染色体不完全隐性遗传。 15～20/10万男孩中有发病，此发病率在所调查的不同的种族和地域之间没有差异。发病率以血友病A最多占85%，血友病B占15%，血友病C罕见。 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * （一）FⅧ的基因结构 FⅧ基因位于X染色体长臂末端（Xq28），包括26个外显子和25个内含子，全长186kb 。 包括26个外显子和25个内含子，其mRNA全长约为9kb，cDNA为9009bp。其翻译产物为 2351个aa残基的多肽链。 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * （二）Ａ型血友病 的遗传方式和基因突变 遗传方式：XR 已报道FⅧ基因点突变174种，缺失117种，插入10种。由于导致HA FⅧ基因的点突变多，故在实际工作中不可能对每一病人作点突变的检测，所以DNA多态性的连锁分析仍然是Ａ型血友病基因诊断的常用手段。 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * A型血友病的分子诊断－PCR-RFLP连锁分析法 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * 血友病A （Hemophilia A, HA） 99bp 43bp 142bp Bcl I Bcl I 142bp School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * Amp-FLP在FVⅢ区内尚有两个VNTP区，一个位于DXS52，另一个位于DX102内，它 仍均具有复杂的多态性，亦可用于连锁分析。 School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University * 其他诊断方法 PCR-SSCP PCR-DGGE School