环巴胺(Cyclopamine)联合奥沙利铂抑制胃癌细胞生长的研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

环巴胺(Cyclopamine)联合奥沙利铂抑制胃癌细胞生长的研究目的： 环巴胺(Cyclopamine)联合奥沙利铂抑制胃癌细胞生长的研究 目的： (1)研究Hedgehog信号传导通路在正常胃上皮细胞和胃癌细胞中 的表达情况。 (2)研究Hedgehog信号传导通路特异性抑制剂环巴胺 (Cyclopamine)与奥沙利铂单药和联合用药对胃癌细胞增殖、细胞周期以及 Hedgehog信号传导通路的影响。 方法：(1)采用RT-PCR方法检测了胃永生化上皮细胞GES．1和胃癌细胞 BGC．823、SGC一7901和MKN-45中Hedgehog信号传导通路各信号分子的表 达水平；(2)采用免疫细胞化学方法检测了MKN45细胞GU蛋白的表达；(3) 采用CCK．8法检测了不同浓度环巴胺和奥沙利铂单药和联合用药对MKN-45细 胞增殖的影响；观察联合环巴胺是否可以提高奥沙利铂抑制细胞增殖的作用(4) 采用流式细胞仪检测了环巴胺和奥沙利铂对MKN-45细胞凋亡和周期分布的影 响；(5)采用Western—blotting检测了环巴胺和奥沙利铂对Hedgehog信号通路 蛋白SHH、GLll表达的影响。 结果：(1)经半定量PCR检测发现在胃永生化细胞GES．1和胃癌细胞 BGC一823、SGC-7901和MKN-45中都存在Hedgehog信号传导通路的表达。 PTCH和SHH在所有细胞中表达均上调，GLI在GES一1和SGC．7901中未见 表达。(2)GLI在MKN-45细胞存在表达，定位于胞核和胞浆。(3)不同浓度 的环巴胺和奥沙利铂对胃癌细胞株MKN-45作用24小时、36小时、48小时后， 均显示出明显的细胞增殖抑制作用，并呈浓度和时间依赖性；而在GES．1细胞 中未观察到环巴胺对细胞的生长抑制作用；环巴胺和奥沙利铂联合用药较单药能 更有效抑制细胞增殖(PO．05)。当15uM环巴胺联合10ug／ml奥沙利铂时， 细胞生长抑制率超过15uM环巴胺和15ug／ml奥沙利铂单药的抑制率。(4)环 巴胺和奥沙利铂单药均可诱导细胞凋亡，并呈浓度和时间依赖性。两药联用后， MKN45细胞凋亡比例较单药明显增加(P0．05)。随环巴胺药物浓度的逐渐递 增，MKN-45细胞G0／GI期比例逐渐增加，S期比例逐渐降低；奥沙利铂也可 增加G0／G1期比例，降低S期比例；两药联合作用后，MKN-45细胞G0／G1期 和G2／M期比例较单药增加更高，S期明显降低(尸0．001 o(5)Western—blotting 显示：环巴胺可以下调MKN一45细胞Hedgehog信号通路中的SHH和GLI蛋白 的表达，奥沙利铂单药对SHH和GLI的表达无明显影响。 复旦大学硕士学位论文结论：(1)正常胃上皮细胞GES一1中存在Hedgehog信号通路，但不表达 复旦大学硕士学位论文 结论：(1)正常胃上皮细胞GES一1中存在Hedgehog信号通路，但不表达 下游转录因子GLI，而胃癌细胞株MKN-45和BGC-823中存在Hedgehog信号 通路的激活，SGC一7901细胞的生长可能不依靠Hedgehog信号通路的激活。(2) GLI表达于MKN-45细胞胞浆和胞核中。(3)环巴胺和奥沙利铂单药和联合用药 均可抑制胃癌MKN-45细胞株的增殖，两药联用较单药作用更明显。(4)环巴 胺和奥沙利铂均可诱导MKN-．45细胞凋亡，使S期DNA合成降低，两药联用较 单药作用更明显。提示环巴胺可提高奥沙利铂对胃癌细胞生长的抑制作用。(5) 环巴胺可下调Hedgehog信号通路中SHH和GLI蛋白的表达，奥沙利铂无作用。 关键词：胃癌；环巴胺；奥沙利铂；细胞周期；凋亡；Hedgehog信号传导 通路； 中图分类号：R73肿瘤学 2 The The inhibitory effect of Cyclopamine in combination with Oxaliplatin in gastric cancer cells Objective：(1)To investigate the expesstion of Hedgehog signal transduction pathway in normal gastric epithelial cells and gastric cancer cells． (2)To explore the effect of cyclopamine，a Hedgehog specific target inhibitor, alone or in combination with oxaliplatin on the growth，cell cycles，appotosis and Hedgehog signalling tra