课件：血清学反应.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 一、直接凝集试验 颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。按其操作方法可分为玻片发和试管法。 * * 1．玻片凝集试验 将已知的抗血清1-2滴，滴于清洁玻片上，取待检菌液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现颗粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。 特点：简单、快速 用途：定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙门氏菌血清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检疫 * * 2．试管凝集试验 是一种定性与定量相结合的方法。试验时用一列试管，将待检血清用0.5%石炭酸生理盐水作10倍递进稀释，每管维持量为0.5ml，一管不加血清作对照。每管中加入一定浓度的抗原0.5ml，混合均匀，在37?C或室温下静置数小时，观察液体的亮度及沉淀物，视不同的凝集程度记录为++++（100%菌体凝集），+++（75%凝集），+（25%凝集）。 * * 凡能与一定量抗原发生50%凝集（++）的血清最高稀释度，为血清的凝集价或效价（滴度）。在试验时，必须建立阴性、阳性血清对照管。 特点：准确、耗时 用途：诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价(定量) * * 二、间接凝集试验 基本原理： 可溶性抗原+惰性载体（聚苯乙烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等） 抗原致敏载体 抗原致敏载体+相应免疫血清(抗体) 电解质 被动载体凝集(间接乳胶凝集、间接炭素凝集、间接红细胞凝集等 ) * * 特点：敏感(在微量反应板中进行试验)、快速。 用途：用已知抗原致敏的载体可检测血清中的特异抗体及其效价。 若用已知免疫血清（Ab）致敏的红细胞，则可检测病毒等可溶性抗原——称为反向间接血凝试验。 * * * * （正向）间接凝集反应原理示意图 * * （反向）间接凝集反应原理示意图 * * 间接凝集抑制反应原理示意图A：标本中含抗原 B：标本中不含抗原 * * 第四节 与补体有关的试验 一、补体的性质 补体是存在于正常动物血清中的一组蛋白质。 补体没有特异性，它能与任何抗原抗体复合物相结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。 补体与抗原抗体的复合物结合后，可出现溶血反应、溶菌反应、补体结合反应、凝集反应、免疫黏膜试验等。由于补体具有这一特性，故常用其来检验抗原或抗体是否发生特异性结合，特异性抗原或抗体是否存在。 * * 二、溶解试验 1.溶血试验 红细胞与相应的抗体（溶血素）相结合后，在补体的参与下，可发生溶血反应（直接溶血反应），以作补体结合反应的指示系统。 吸附抗原的红细胞与抗体结合后，在补体存在下可以引起溶血反应，这种反应称为间接溶血反应。间接溶血反应只能用新鲜红细胞，而新鲜红细胞不易保存，限制了本法的应用。 * * 2.溶菌试验 某些细菌（如霍乱弧菌）与抗体结合后，如有补体存在，可发生细菌溶解或被杀死，这种反应称为溶菌反应或杀菌反应。 * * 三．补体参与的试验—补体结合试验 补体结合试验是应用可溶性抗原与相应抗体结合,其抗原抗体复合物可以结合补体,但这一反应肉眼看不到,如再加入致敏红细胞,即可根据是否出现溶血反应判断反应系统中是否存在相应的抗原和抗体. * * 1．参与反应：抗原抗体反应系统、补体（豚鼠血清）、指示系统（绵羊红细胞、溶血素）。 2．反应原理：（如下图所示）。 3．特点：敏感性特异性高。 正式试验前要进行下列测定，操作较繁（溶血素效价、补体效价、抗原效价）。 4．用途：用于牛肺疫、副结核、布氏杆菌病、锥虫病、马传贫、鼻疽等的检疫。 * * * * 中和试验（病毒、毒素中和试验） 原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易 感动物、鸡或鸡胚、细胞活性。 例1 NDV 9～11d鸡胚 24～48h 鸡胚死亡 NDV+抗血清 9～11d鸡胚 鸡胚不死亡 第四节 中和试验 * * 例2 口蹄疫病毒(FMDV) 4～7d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV