氟化物小鼠睾丸间质瘤细胞睾酮合成的影响-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docx

-M川川川AEm - M川川川AE mww肌肉 州州唰唰AE， 酬川川KJW 川川抖 。 酬川川00 阳阳川川AE· 咖唰V· 本人郑重声明:所里交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年月日 学位论文使用授权声明 期口川本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家育关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被沓阅和借阅:本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文戚与该学位论文直接相关的学术论文成成果时，第一署名单位仍然为郑 期 口川 学位论文作者: 年月日 摘要 摘要 摘要HCG，培养他后， 摘要 HCG，培养他后，RIA 法测各孔培养基中孕酬的含量 ;(2)单纯的 10.0IU/ml HCG 剌激和 10.OIU/ml HCG 和 16μglml NaF的混合剌激，分别在 lh、劫、3h、6h、 12h、24h 取培养上请，阳A 测定培养上请中孕酬的含量; (3)依次加入含 NaF 浓度为 0、8、12、16 和 20gI时，含 HCG 浓度为 lOIU/ml 的无血泊的培养基， 培养 2h 后， RIA 测定上请中孕酬的含蠢。 3.mLTC斗细胞中 StAR 和 P450scc mRNA 表达水平:采用实时定量 PCR 法 将铺满瓶底的 80%以上的 mLTC斗细胞分别加入含不问浓度 NaF (0、8、12、 摘要 氟是地球上广泛存在的元素，作为机体生命活动必需的微量元素，具有多方 面的生理作用。近年来，国内外学者对氟及其化合物的生殖毒性作用进行了大最 的研究。动物实验资料和人群流行病学调查资料证实氟不仅可以直接作用于靠 丸和附翠，破坏其结构，造成生殖损伤，还可以通过干扰下丘脑一垂体-性腺轴 和罪丸局部微环境，引起生贿毒性。生殖系统异常是人类内分泌系统异常的主 要表现，在人类主要表现为:男性精子密度减小，质最下降，不育比例上升， 靠丸癌患者增加;女性乳腺癌、子宫内膜症增加及不良生殖结局增加等。这种 现象的产生被认为是环境中存在有干扰内分泌系统的化学物，并提出了环境内 分泌干扰物的概念，环境内分泌干扰物 (Environmental Endocrine Disruptors ，EEDs) 既能影响正常的激素产生、释放、运输、代谢或消除，还能影响同源受体结合 和/戒随后的细胞内受体作用。目前，氟对雄性生殖系统的损害，主要是氟对翠 丸结构的破坏和精子的数量及质蠢的变化，还有对内分泌的影响等，但其作用 机制目前还未见报道。 目的: 利用MA-I0小鼠靠丸问质瘤细胞 (MA-lO mouse Leydig tumor cells，mLTC-l) 作为模型，观察 NaF对罪丸问质瘤细胞翠酣合成的影响，并探讨其作用机制，为 下一步研究提供理论依据。 方法: 1Mπ法检测mLTC斗细胞的活性，通过进行 NaF对体外培养mLTC-l 细胞的 毒性实验确定染毒剂量为 8Jlglml 、12μglml、16μglml和20μ gI时，以无血清培养 基为对照。 2.mLTC斗细胞培养基上请中孕酣( Progesterone) 的分泌最:采用放射免疫 法 (radioimmunoassay ，RIA) 将对数生长期的 mLTC斗细胞接种到 24 孔板中。 (1)分别加入浓度为 O.OIU/ml 、O.IIU/ml 、1.OIU/ml、10.0IU/圳、 100.OIU/ml 的 16 和 20μglml) 的无血清的培养基，培养 2h 后，提取 RNA，使用实时定量PCR 仪测定各个浓度组 NaF对 mLTC-l 细胞 StAR 和 P450scc mRNA 的表达。 结果: 1.根据生长曲线可知，体外培养的 mLTC斗细胞在4d，细胞的活性最强， 代谢旺盛。 2. mLTC-l 细胞培养基上请中孕酬的分泌量:给予 HCG 刺激后， mLTC斗 细胞分泌孕酣最随 HCG 浓度的增加而增加，在 lOIU/ml 时，其分泌量进入平台 期，故选择该浓度作为 HCG 最佳剌激浓度。 3. mLTC斗细胞中 StAR 和 P450sωmRNA 表达水平: 12 glml、16μglml、 20μglmlNaF浓度组的 StAR 和 P450 mRNA 的达量比对照组这两个基因表达最 低，且差异有统计学意