健脾丸抗肝癌作用其作用机制实验の研究.pdf

中文摘要 健脾丸抗肝癌作用及其作用机制的实验研究 摘 要 目的：通过体内外实验，探讨健脾丸的抗肝癌作用， 并提示其可能的作用机制，为该方治疗肝癌提供理论依据， 并树立中医肝癌“本”是“脾虚”的观点。 方法：1体外实验：运用中药血清药理学原理和方法， 制备健脾丸含药血清。采用四氮唑盐(MTT)法检测不同 浓度健脾丸含药血清对人肝癌细胞SMMC．7721作用24h、 48h、72h增殖抑制作用的影响。应用流式细胞技术(FCM) 检测不同浓度健脾丸含药血清对人肝癌细胞SMMC．7721 作用72h后细胞凋亡率和细胞周期，及细胞bcl。2和bax基 因蛋白表达。2体内实验：取60只昆明种小鼠，无菌条件 下将小鼠肝癌细胞H22腹水瘤细胞接种Nd,鼠右腋皮下， 化疗(5．氟尿嘧啶)组每天腹腔注射0．2ml／只，即0．5mg／ 1．2089／ml灌胃，0．4ml／只；阴性对照组每日灌服生理盐水 0．4ml／只。每日灌胃一次，连续给药10天，于次日处死， 剥离瘤组织，称重，计算抑瘤率。取脾脏称重，计算脾指数。 采用流式细胞技术(FCM)检测各组瘤组织细胞凋亡率和 细胞周期，及细胞bcl．2和bax基因蛋白表达。采用免疫组 化法观察不同浓度瘤组织细胞形态，及bcl．2和bax基因蛋 白表达情况。 结果 中文摘要 1体外实验结果 后，低、中、高剂量组细胞抑制率分别为：7．28％、11．44 ％、26．14％，与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞 高剂量细胞凋亡抑制率分别为：15．67％、20．90％、33．47％， 与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞SMMC．7721的生 长(P0．05)。作用72小时后，低、中、高剂量细胞凋亡抑 且中药对肝癌细胞SMMC．7721的生长抑制作用呈剂量时 间依赖性。本实验结果显示，在一定浓度范围内中药健脾丸 能抑制肝癌细胞SMMC．7721的生长。 1．2健脾丸含药血清低、中、高剂量组作用于肝癌细胞 ％，各中药组与其相比均有显著差异(PO．05)。S期细胞 期细胞比例为：35．933％，各中药组与其相比均无显著差异 (PO．05)。低、中、高剂量组凋亡率分别为；6．985％、 其相比均有显著差异(PO．05)。且细胞凋亡率随中药健脾 丸剂量增加而升高。 1．3流式细胞仪定量分析，结果显示：健脾丸含药血清低、 中、高剂量组细胞bcl．2基因蛋白的荧光指数(F1)分别为 中文摘要 照组为1．1814±0．0035，各实验组与阴性对照组相比均有显 著差异(P0．05)，且随健脾丸含药剂量增加蛋白表达呈降 1．0392±0．0208，各组与阴性对照组相比均有显著差异 (P0．05)，且随健脾丸含药剂量增加bax蛋白表达呈增加 趋势。 2体内实验结果 2．1健脾丸低、中、高组对H22移植瘤具有明显抑制作用， 组相比均有显著差异(P0．01)，并呈剂量依赖性。化疗组 抑制率为52．76％，健脾丸高剂量组与之相比无显著差异 (PO．01)。 2．2健脾丸低、中、高剂量组荷瘤小鼠的脾指数分别为：8．038 2．3低、中、高剂量组瘤组织细胞经流式分析仪检测后，Go／G， 性对照组为：58．400％，与对照组相比均有显著性差异 (P0．05)。低、中、高剂量组肿瘤细胞凋亡率分别为： 性对照组相比均有显著性差异(P0．05)。5．FU组细胞凋亡 率为47．71％，健脾丸高剂量组低于阳性对照组(P0．05)。 2．4健脾丸低、中、高剂量组，瘤组织细胞bcl-2基因蛋白 中文摘要 1．0420±0．0682；各实验组与阴性对照组相比均有显著差异 (P0．01)，且随健脾丸含药剂量增加蛋白表达而降低。bax 加。 2．5免疫组化检测中，因样本含量较少不足以进行统计学分 析，但经组织形态学分析，中药低、中、高剂量组细胞浆中 出现棕黄色颗粒说明bcl．2基因蛋白表达阳性，且可看到随 中药剂量增加bcl．2表达逐渐减弱。中药低、中、高剂量组 细胞浆中亦出现棕黄色颗粒说明bax基因蛋白表达阳性，且 随中药剂量增加bax表达逐渐增强。以上基因蛋白表达趋势 与流式定量分析所得结果相符。 结论 1健脾丸可抑制肝癌细胞的生长，与对照组比，各浓度组在