放线菌选择性分离方法及系统分类研究-微生物学专业论文.docx

I I 摘要 摘 要 本文第一章综述了放线菌分离方法研究进展及发展趋势 同时介绍了当前放 线菌多相分类所采用的技术方法及研究进展 本论文第二章分离并对所得到的三株链霉菌噬菌体 HPA1 HPA2 HPA3 进行 了研究 目的是通过了解它们的特性 来选择性分离放线菌 首先对它们的形态 学和稳定性进行了研究 在营养琼脂培养基平板上 它们所形成的噬菌斑形状各 不相同 噬菌体 HPA1 所形成的噬菌斑大小中等且透明 HPA2 的噬菌斑较大 中 间透明边缘模糊 似日晕状 而 HPA3 的噬菌斑较小 针眼状 电镜观察指出 三 株噬菌体的头部外形都呈球形 但其大小和尾部长度有所不同 HPA1 长尾 HPA3 短尾 而 HPA2 无尾 然后检测了它们的宿主范围 它们的宿主范围较窄 除链霉 菌的某些属外 它们不能侵染链孢囊及其他属的放线菌 其中 HPA2 对氯仿和温度 的耐受力都较强 且在 60 时 仍有 21%能够存活 本论文的第三章利用以上分离的三株链霉菌噬菌体 HPA1 HPA2 HPA3 对 6 份采自云南不同地区的土样进行分离 从实验结果来看 加入噬菌体的平板的出 菌率要低于对照板 且白色链霉菌和灰色链霉菌类群的出菌率明显要少于未加入 噬菌体的平板 一些其它类群的放线菌的出菌率大大增加 说明在分离放线菌时 加入链霉菌噬菌体 常规链霉菌的数量大大减少 从而增加稀有放线菌的分离几 率 证实了利用链霉菌噬菌体分离新类群放线菌的方法有一定的可行性 本论文的第四章采用形态学 细胞化学 DNA G+Cmol%及 16SrDNA 序列分 析等多相分类技术对所分离的五株放线菌进行了系统的分类研究 经形态观察发现 菌株 Y70011 Y70012 形态较特殊 菌落皮革状 无气丝 两个菌株的形态有些细微的差别 插片观察产生大量晶体 菌株 Y70013 可形成柱 状孢子 表面光滑 菌株 Y70014 产生的孢子卵圆状 表面有刺突 菌株 Y70015 可形成小孢囊 对五株放线菌的全细胞壁氨基酸及全细胞糖型 磷酸类脂及甲基奈醌进行了 分析 结果表明 菌株 Y70011 Y70012, Y70013 Y70014 细胞壁含 L L-DAP 糖型 C 型 磷酸类脂 P 型 醌为 MK-9(H4,H6,H8) 菌株 Y70015 细胞壁含 II II 摘要 meso-DAP 糖型 B 型 磷酸类脂 P 型 醌为 MK-9(H2,H4,) 通过上述分类结果 菌可初步判断菌株 Y70011 Y70012, Y70013 Y70014 应归于链霉 Streptomycetes 菌 属 菌株 Y70015 应归于链孢囊菌Sterptosporangium属 通过测定五株放线菌的 DNA G+Cmol% 表明其 DNA G+Cmol%分别与其相 应属 DNA G+Cmol%相吻合 16S rDNA 序列分析结果最后确定了各菌株的归属 通过将测得的 16S rDNA 序列与 GenBank 中序列相比较最终确定 菌株 Y70011 Y70012, Y70013 Y70014 为链霉菌 菌株 Y70015 是链孢囊菌属的放线菌 其中 菌株 Y70011 Y70012, Y70014 同与之亲源关系最近的菌株的序列相似性分别 97.762% 97.629% 97.323% 应为新种 而菌株 Y70011 Y70012 之间的序列相 似性为 99.929% DNA-DNA 同源性分析即 DNA-DNA 分子体外杂交表明 两株 菌的 DNA 同源性为 51.9% 所以为不同的链霉菌属的新种 菌株 Y70013 Y70015 同与之亲源关系最近的菌株的序列相似性分别 98.855% 98.64% 序列相似性在 98%以上的模式菌分别有 2 株和 5 株 通过 DNA-DNA 分子杂交表明 菌株 Y70013 与 2 株模式菌的 DNA 同源性都在 70%以下 所以为一新种 菌株 Y70015 与长孢 链孢囊Sterptosporangium longisporumJCM3106 的 DNA 同源性为 92.89% 所 以与之为同一种 通过上述多相分类研究 确定了五株放线菌的分类地位及系统发育关系 关键词 链霉菌噬菌体 放线菌分离 多相分类 PAGE PAGE IV Abstract Abstract In the first chapter of this thesis, isolation methods of actinomycetes have been introduced and the current methods applied to polyphasic taxonomy for actinomycetes h