医学常见的中药鉴定学.ppt

中药鉴定学的新技术与新方法 汪哲宇 钟隆洁 吴佳佳 2016.10.14 目 录 性状显微鉴定技术 化学鉴定技术 分子鉴定技术 分子鉴定技术 分子鉴定技术 核酸分子鉴定 蛋白质分子鉴定 基于序列分析 抗血清鉴定 飞行时间质谱鉴定 电泳鉴定 同工酶鉴定 直接测序 基于PCR 基于分子杂交 PCR-RFLP 条形码技术 位点特异性PCR RAPD AFLP SCAR SSR RFLP DNA芯片 分子鉴定技术 分子鉴定技术 1. DNA条形码鉴定技术 定义：生物体内能够代表该物种的、标准的、 有足够变异的、易扩增且相对较短的 DNA片段。 DNA条形码鉴定技术 在中药鉴定中的应用 以ITS2序列为核心、psbA-trnH为补充序列的DNA条形码鉴定体系 植 物 以COI序列为核心、ITS2为补充序列的DNA条形码鉴定体系 动 物 DNA条形码鉴定技术 信息量大且相对稳定 ITS2序列（internal transcribed spacer 2） 鉴定速度快，可批量鉴定 对鉴定材料要求较低 分子鉴定技术 2. 位点特异性PCR鉴定技术 待鉴定种（变异性位点一） 伪混品（变异性位点二） 3’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 引物 引物 PCR PCR 可扩增 不可扩增 位点特异性PCR鉴定技术 关键点 获得种内稳定的碱基变异位点 鉴定引物的设计 在中药鉴定中的应用 流苏石斛 蕲蛇 东方泽泻 分子鉴定技术 3. 序列特异性扩增鉴定技术（SCAR） a. RAPD标记分析 b. RAPD特异片段回收、克隆及测序 c. SCAR标记的建立 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ A B 随机引物PCR扩增 聚类分析 A类 B类 进一步筛选 特异性条带F300 3’ 5’ 5’ 3’ 克隆，测序 回收 TTCAGGGCAC 设计特异引物 5’ 3’ 对A和B进行扩增 3’ 3’ 5’ 5’ A 5’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ B 5’ 3’ 可扩增 不可扩增 RAPD标记 成功转化为 SCAR标记 参考文献 [1] 王川易、郭宝林、肖培根.中药分子鉴定方法评述 [J]. 中国中药杂志,2011,36(3):237-240. [2] 陈士林、郭宝林、张贵君等.中药鉴定学新技术新方法研究进展[J]. 中国中药杂 志,2012,37(8):1043-1045. [3] 费希同、巨苗苗、林源等.ITS2序列在植物DNA条形码鉴定中的应用[J]. 亚热带植物科 学,2014,43(4):339-342. [4] 田孟良、官宇、刘帆等.基于RAPD标记的SCAR分子标记技术鉴定川牛膝及其混淆品 [J]. 中国中药杂志,2010,35(8):953-955. [5] Li X X , Ding X Y , Chu B H , et al. Molecular authentication of Alisma orientale by PCR-RFLP and ARMS [J]. Planta Med,2007,73(1):67. [6] Lu S, Ding X Y , Han L , et al. Confirming the genetic identity of Dendrobium fimbriatum using an Amplication Refractory Mutation Systems(ARMS) [J]. PI Mol Biol Rep,2010,doi:10.1007/s11105-010-0190-4.. 化学鉴定技术 化学鉴定技术 光谱鉴定技术 色谱鉴定技术 红外光谱鉴定技术 HPLC鉴定技术 GC鉴定技术 HPCE鉴定技术 拉曼光谱鉴定技术 X-射线衍射图谱鉴定技术 化学鉴定技术 色谱|光谱联用 HPLC-MS鉴定技术 其它色谱-光谱联用技术 光谱鉴定技术 1. 红外光谱鉴定技术 原理：不同的化学键或官能团吸收频率不同，在红外光谱上将处于不同位置，可获得分子中化学键或官能团的信息 近红外区(0.75~2.5 μm)、中红外区(2.5~25 μm)和远红外区(25~300 μm) 化学鉴定技术 优势 局限性 存在谱图影响因素多、背景复杂、谱峰重叠等限制 近缘物种可能在图谱总体特征上变化较小 不同的采收、加工、处理等可能较大影响药材总体成分变化 仪器通用，操作简便，成本低，无污染，重复性好 实现各种形态样品的快速、