非小细胞肺癌化疗耐药-敏感的血清蛋白质标志物筛选、鉴定.docVIP

广州医学院 硕士学位论文 非小细胞肺癌化疗耐药/敏感的血清蛋白质标志物筛选、鉴定 姓名：傅文凡 申请学位级别：硕士 专业：胸部外科学 指导教师：赵健广州医学院硕士学位论文 非小细胞肺癌化疗耐药/敏感相关血清蛋白标志物的筛选、鉴定 非小细胞肺癌化疗耐药/敏感的血清蛋白质标志物筛选、鉴 定 硕士研究生： 傅文凡 导 师： 赵健教授 中文摘要 背景与目的： 肺癌是目前全球发病率、死亡率最高的恶性肿瘤之一，占全部恶性肿瘤的 16%，全部癌症死亡的28%。其发病率有明显上升趋势，在我国肺癌的发病率也逐 年上升，并且已经成为我国城市人口癌症死亡的首要原因。据统计，我国 2004-2005肺癌的死亡率为30.83/10万，居第一位。 非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌的主要病理类 型，占80％，其中肺腺癌约占总病例的35%-40%。尽管过去20年中第三代化疗药 物及靶向治疗药物不断涌现，其生存期却无明显改善。非小细胞肺癌的5年生存 率仅为14%,其主要原因是不能早期诊断和化疗耐药。70％的NSCLC在发现时已属 晚期，失去手术治疗的机会，所以大部分病例是以化疗为主的综合治疗，但目前 晚期非小细胞肺癌肺癌的标准一线治疗-含铂两药方案有效率仅40%左右。本实验 入组病例40例回顾性分析，有效率为35%也证实了这一点。因此寻找能够预测非 小细胞肺癌化疗敏感/耐药性的生物标志物，指导临床个体化用药具有重要意义。 常见能够预测肿瘤化疗的敏感性的方法有：1．体内药敏实验；2．体外药敏 实验；3．肿瘤标志物的检测；4．耐药基因的检测。但目前预测化疗敏感性的方 法都有不少缺点，仍然不够理想，主要存在与临床相关性较差，费时较长等问题。 理想的方法应该：1.与临床相关性好，敏感性、特异性较好；2.简单、快速、 费时短；3.标本易获取,可多样化；4.可筛选多种药物； 5.可操作性强,能标准 3 广州医学院硕士学位论文 非小细胞肺癌化疗耐药/敏感相关血清蛋白标志物的筛选、鉴定 化；6.费用低廉，易于临床推广。 无论是耐药基因的突变、表达水平的改变，或者是药物泵改变还是抗凋亡途 径调整出现的耐药，最终的执行者都是蛋白质。从蛋白质水平来寻找能够预测肿 瘤化疗耐药的的生物标志物有着重要的意义。蛋白质组(proteome)指的是一个基 因组(genome)或一种细胞／组织所表达的全部蛋白质 (protein)。蛋白质组学 (proteomics)就是从整体的角度，分析动态变化的蛋白质组成、表达水平和修饰 状态，了解蛋白质之间的相互作用。可以说蛋白质组研究的开展不仅是生命科学 研究进入后基因组时代的里程碑，也是后基因组时代生命科学研究的核心内容之 一。 表面增强激光解析电离飞行时间质谱(Surface-enhanced laser desorption ionization time of flight mass stectrometry，SELDI-TOF-MS)将结合了能量 吸收分子后的蛋白质在激光的激发下电离，带有电荷的蛋白质在加速电场的作用 下，不同质荷比的蛋白质在长度一定的真空管中飞行所需的时间不同，带有正电 荷的蛋白质离子束在到达检测器的一瞬间，电子倍增器将产生瞬时电流，转换成 蛋白质的相对含量。它将蛋白质芯片和表面增强激光解析电离飞行时间质谱有机 地结合在一起，具有样品用量小、操作简便、灵敏度高、高通量等优点。通过配 套生物信息学软件，可以寻找到差异蛋白，建立诊断模型。是寻找血清等蛋白生 物标志物的理想手段。 SELDI-TOF-MS技术目前已广泛用于多种疾病的早期诊断及指导治疗，在筛选 肿瘤特异性蛋白质中的应用最为广泛，也显得最为重要。但由于技术的局限性， 发现的蛋白峰，无法知道其序列，下游的研究工作困难。Clinport技术的磁珠 可以分离纯化血清的中低丰度小分子量蛋白。MALDI-TOF-MS是近年来发展起来 的一种新型的软电离生物质谱，用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质 从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生 物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加 速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比 （M/Z）与离子的飞行时间成正比，检测离子。TOF/TOF对于 MS/MS模式可通过 第一级TOF选择母离子进入高能碰撞池中碰碎，然后进入第二级TOF重新被加速 并被分析，不仅能够检测蛋白质的肽谱，同时可以检测肽序列。 4 广州医学院硕士学位论文 非小细胞肺癌化疗耐药/敏感相关血清蛋白标志物的筛选、鉴定 研究目的： 本实验拟通过联合利用 SELDI-TOF-MS技术、 c