开题报告-5’-氮杂脱氧胞苷联合放疗对鼻咽癌RASSF1A基因甲基化和表达影响.ppt

硕士研究生开题报告 5’-氮杂脱氧胞苷联合放疗对鼻咽癌RASSF1A基因甲基化和表达的影响 开题报告 一、立题依据与研究现状 二、实验目的 三、技术路线 四、主要实验方法 五、预期结果 六、经费预算 七、时间安排 立题依据 RASSF1A基因 RASSF1A蛋白 RASSF1A基因的高甲基化与肿瘤 5’-氮杂脱氧胞苷 RASSF1A基因 很早以来，医学研究人员就发现肿瘤患者3p 染色体出现等位缺失的现象,（常见肺癌患者）,于是推测该区域可能存在某种抑癌基因。 1998 年,Sekido 等在肺癌及乳腺癌细胞系的研究中发现3p21. 3 存在一个120kb长的最小纯合缺少区。 2000 年,Dammann 等[4 ] 使用酵母双相杂交筛选的方法自该区分离出一种能与DNA 修补蛋白(XPA) 相互作用的候选cDNA(互补DNA) ,其核苷酸序列的羧基端与鼠RAS 效应蛋白Nore1 和Maxp1 高度同源,遂命名为RAS 区域相关家族1 ,即RASSF1 基因 RASSF1A基因 Ras 基因除了具有促进细胞生长、增殖的作用外还具有一个非常重要的功能———抑制细胞生长、促进细胞凋亡和衰老。RASSF1A 基因可能是Ras 激活信号传导通路中一个非常重要的负向调节基因,在肿瘤的发生、发展、预后等方面具有重要意义。该基因主要存在3 种不同的转录本，共同编码与Ras 相关的同源区(RalGDS/AF26 ,RA)。这三个转录本分别是： RASSF1A 、RASSF1B 、RASSF1C RASSF1A RASSF1A 含外显子1α和2αβ,其cDNA 全长1 873 bp ,含340 个氨基酸的开放读码框,编码产物为相对分子质量为38 800 的蛋白多肽,其N端与富含半胱氨酸的甘油二酯或佛波酯结合区高度同源,也被称作蛋白激酶C 保守区1 (protein kinase C conserved region 1 ,PKCC1)。在正常组织中都有表达,但在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、鼻咽癌、肾癌等肿瘤中存在较高的表达缺失。 RASSF1B RASSF1B 也含外显子2αβ,但其外显子1β与转录本A 不同,该转录本cDNA 全长1 664 bp ,可能仅编码Ras同源区(RA)。主要表达于造血系统的组织细胞,在肿瘤中的表达缺失率不高,约37.13 % RASSF1C RASSF1C 外显子起自1γ,无2αβ,全长117 kb ,编码含270 个氨基酸的蛋白,但不含PKCC1 区, 相对分子质量为32 000。正常组织和肿瘤中都有较好的表达 因此，RASSF1A基因可以成为一种研究的重要候选抑癌基因。表达产物是RASSF1A 蛋白 RASSF1A蛋白 RASSF1A 蛋白作为Ras 效应蛋白家族中的一员,主要以GTP 依赖的方式结合Ras 传导通路上游的Ras/ GTP 而被激活发挥抑制细胞生长、促进细胞凋亡和衰老的功能。 研究发现,RASSF1A 蛋白的氨基酸序列除了包含RA 区、PKCC1 区外还包含了一个ATM(ataxia telangiectasia mutated) 蛋白的磷酸化位点，ATM参与细胞周期调控、有丝分裂中染色体重组、端粒长度监测及DNA 损伤细胞学反应。 RASSF1A 蛋白通过磷酸化ATM 蛋白的PI3K位点活化来发挥抑制肿瘤的作用。 RASSF1A蛋白 1、RASSF1A 蛋白通过抑制Ras 激活生长效应信号的传导途径而发挥作用;另一种可能机制则是RASSF1A 蛋白的失活导致Ras 作用的失衡,使其主要发挥促进生长的作用。 2、RASSF1A 蛋白可能是细胞周期蛋白D1 (cyclin D1) 的抑制蛋白。cyclin D1 对RASSF1A 蛋白的活性非常敏感,活化RASSF1A 蛋白能明显的抑制cyclin D1 在细胞内积聚从而抑制细胞由G1 期进入S 期,对细胞增殖起负性调节作用。 RASSF1A蛋白 3、RASSF1A 蛋白在分裂间期分布在细胞微管,在有丝分裂期分布在细胞中心体和纺锤体, 并最终通过细胞分化周期调控蛋白20 ( cell division cycle control protein20 ,cdc20) 作用到促后期复合物(anaphase promoting complex ,APC) 上,抑制APC 磷酸化活性使细胞有丝分裂停滞在中后期 RASSF1A基因高甲基化与肿瘤 现已明确RASSF1A 基因在肺癌等癌症中表达失活的机制是由于其启动子区CpG岛的特异性高甲基化所致。 虽然抑癌基因的失活还可由突变所致,但对该基因的研究结果表明,RASSF1A 基因的突变率在肺癌中还不及10 %,而RASSF1A 启动子区发生高甲基化的比率在小细胞肺癌、非小细胞肺癌系中分别高达100