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实验室菌种管理规程 目的：保证菌种合理、有效地使用和保存，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，保证实验室和社会的生物安全。 职责：主管负责菌种的出入库保管、保存、分发，组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。 范围：本规程适用于实验室菌种的管理，包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。 1 菌种的保存 1.1 工作用菌种的保存 工作用菌种采用平板低温保存法。将菌种接种在适宜的固体培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间为1周，超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化，若菌落活力下降则从-80℃冰箱中取用甘油冷冻管。 1.2 传代用菌种的保存 采用甘油冷冻管保藏法。 1.2.1 甘油冷冻管保存法 用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内，置于适宜的培养条件下培养，菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内，再加入等体积的无菌甘油（浓度40%），即为20%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，在-80℃冷冻条件下保存，保存期限为3年。每个菌株保存至少30个无菌冷冻管。使用时，取出一支放至室温，接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏，挑取纯菌落传代或工作用。 2 菌种的传代 2.1 工作用菌种的传代 当工作用菌种代数小于5时，在规定保存期限内，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。取在冰箱2～8℃保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。菌种每1周传代一次，当超过5代，须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。 2.2 传代用菌种的传代 首先划线接种确认，根据日常检验工作的需要量，挑取纯菌落转接平板，作为工作用菌种；同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落制成菌悬液，按“1.2”的方法制备甘油冷冻管数支，作为传代用菌种。 2.3 传代时注意事项 无菌操作，使菌株不死亡，不污染、不丢失。同时实验人员也要采取有效的预防措施进行自我保护，如工作时必须穿工作服，佩带无菌手套，实验完成以后消毒实验进行的区域、实验仪器和器具。如发生意外，如菌种泄漏或人员受伤，应立即向主管报告以便及时进行处理。 3 菌种的保管 3.1 实验室全部菌种都应由菌种负责人记录在册，并输入电脑以电子版形式存档，以便查找。菌种上应贴上明显的标签，标明名称、培养基、保种人、日期、编号等。菌种设专人加锁保管，并对所保存的菌种建立《菌种保存、领用登记台账》（附表3）。 3.2 菌种的定期检查 在菌种的保存期间，应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉，如有异常应及时处理。 3.3 所保管的菌种，不能随意转让其他单位和个人，需要时应有单位证明和批准手续以及李爱科组长签字方可供应。 4 菌种的领用与使用 4.1 实验室人员根据实验需要，需到主管领取工作用菌种或传代用菌种，同时填写《菌种领用登记台账》相关内容。 4.2 实验室人员从主管领取工作用菌种或传代用菌种，用于日常检验或验证试验，使用后及时填写《菌种使用登记台账》（附表6），以便追踪菌种使用历史。 5 菌种（废弃）的销毁 下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等，必须采用121℃、45分钟湿热灭活处理：新一代菌种制备成功后的上一代菌种；使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；超过有效期的菌种；凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种；其他应废弃的菌种。 6 附则 附表1：《检定菌接收记录》 附表2：《检定菌种传代、分离记录》 附表3：《检定菌种保存、领用登记台账》 附表4：《检定菌种观察记录》 附表5：《检定菌种鉴定记录》 附表6：《检定菌种使用登记台账》 附表7：《废弃菌种（物品）销毁处理记录》 菌种资源详细信息（密） 此项信息不对外公布，保存核心成员手中。 菌种登记：编号+详细名称+来源+特性+动物实验+……，随时补充，留照片。 附表1：《菌种接收记录》 记录名称 菌种接收记录 代码 页次 1 共 页 名称及编号 数量 代数 来源 接收日期 接收人 检查情况 保存条件 附表2：《菌种传代、分离、保存记录》 记录名称 菌种传代、分离记录 代 码 页次 1 共1页 名称及编号 购进（领取）日期 年 月 日 来源 传代前菌种保存方法 传代用培养基 传代日期 传代用 菌种编号 总数量 传代用菌种 工作用菌种 操作人 数量 编号 有效期 保存 方法 数量 编号 有效期 保存 方法 分离与纯化过程 纯度 检查结果 操作人： 复核人： 附表3：《菌种使用登记台账》 记录名称 菌种保存、领用登记台账 代码 页次 1