五味子主要有效成分综合提取方法.doc

五味子主要有效成分的综合提取方法 　　摘要：五味子先经水蒸气蒸馏提取挥发油并收集后，再将水提液与药渣分离，对水提液浓缩后加入乙醇沉淀多糖，对药渣采用超声波-微波辅助乙醇溶液萃取木脂素。结果显示，与未提挥发油而分别直接水提、醇提的五味子比较，该方法所获得的五味子多糖、木脂素类成分含量均未有明显变化。水蒸气蒸馏法能同时提取五味子挥发油和多糖，剩余药渣可作为原料，采用超声波-微波法继续提取木脂素，消耗时间短，溶剂用量小，操作简便。由此可知，该方法能节约资源，降低成本，充分提高药用资源五味子的利用率。 　　关键词：五味子；挥发油；多糖；木脂素；超声波-微波法；综合提取 　　中图分类号： R284.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0273-03 　　收稿日期：2013-10-08 　　作者简介：程振玉（1986―），男，硕士研究生，研究方向为天然产物化学。E-mail：844503608@。 　　通信作者：杨英杰。E-mail：yanghjm@163.com。五味子是五味子科植物五味子（Schisandra chinensis Baill）的干燥成熟果实，主产于吉林、辽宁、黑龙江、内蒙古等地[1]。五味子具有很高的药用价值，《中华人民共和国药典》（2010年版）中明确指出五味子具有收敛固涩、益气生精、补肾宁心之功效，用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、盗汗、短气脉虚、心悸失眠等症[2-3]。五味子除药用外，还可以作为调味剂和食品添加剂用于炖鱼炖肉、熬汤、熬粥、泡茶、加工酸奶等果汁饮料[4-6]。现代药理研究表明，多糖、挥发油、木脂素[7-9]是五味子的主要活性成分。其中，木脂素尤其是联苯环辛烯类木脂素（其成分包括五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素）[10]，除了具有保肝降酶、止咳、抗炎消毒作用外，还具有抗氧化、抗衰老、抗癌症、消除疲劳、增强机体免疫力等活性[6，8]，已广泛用于临床治疗。多糖具有与之类似的活性，且对糖尿病有显著的治疗效果。挥发油具有良好的镇咳作用，其效力相当于75%的可待因[11]。五味子醇甲、五味子酯甲等木脂素类成分在传统提取方法中主要采用冷浸法、回流法和渗漉法等，这些方法提取时间长、活性成分提取率低；超声波-微波协同萃取新技术将超声波与微波2种作用相结合，充分利用超声波振动的空化作用和微波的高能作用，克服了常规超声波和微波萃取的不足之处，具有溶剂用量少、提取时间短、提取效率高、操作简单等优点；RP-HPLC分析方法准确、灵敏度高、重现性好。本研究对五味子木脂素的萃取方法进行了改良，建立了超声波-微波协同萃取-高效液相色谱同时检测5种木脂素的方法。关于五味子木脂素、挥发油、多糖提取方面的相关文献报道较多，但是对上述活性物质的提取都是分开进行的，某单一成分提取后的药渣往往被作为废弃物扔掉，严重浪费了五味子的药用资源，因此研究综合利用五味子的意义越来越重要，一种综合提取木脂素、挥发油、多糖的新方法亟需建立。本研究先采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，再将水提液与药渣分离，对水提液进行醇沉，对药渣采用超声波-微波法再次提取。通过将本提取方法与未提油而分别直接水提、醇提五味子的方法进行比较，探讨五味子挥发油、多糖与木脂素综合提取新方法的可行性。 　　1材料与方法 　　1.1仪器 　　P230依利特高效液相色谱仪，EC2000色谱工作站，配UV-230+紫外可见检测器，722型-可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司），CW-2000A超声波-微波协同萃取/反应仪（中山大学-上海新拓分析仪器科技有限公司），RT-08多功能粉粹机（荣聪精密科技有限公司），RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），Allegra 64R离心机（BACKMAN公司），SHZ-D循环水式真空泵（河南省巩义市英峪仪器一厂）。 　　1.2药品及试剂 　　五味子药材购买于吉林省通化市，产地为长白山地区，经吉林化工学院环境与生物工程学院隋新副教授鉴定为五味子的干燥果实。 　　对照品五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素来自中国药品生物制品检定所，五味子醇甲、五味子丙素来自上海源叶生物科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，试验用水为超纯水。 　　1.3测定项目与方法 　　1.3.1五味子木脂素含量的测定 　　高效液相色谱条件Hypersil ODS C18柱（4.6 mm×250 mm×5 μm）。流动相为乙腈（A）和水（B）：0～10 min，40%～55%A；10～20 min，55%～68% A；20～25 min，68%～74% A；25～32 min，74%～75% A；32～37 min，75%～100% A；37～48 min，100%A；48～48