核医学科-体外分析.ppt

* 将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。将链霉亲和素（SA）包被磁珠加入反应杯中，再次孵育，使生物素（B）通过与亲和素（A）的结合，将磁珠、Ab连接为一体，形成双Ab夹心法。 链霉亲和素包被、生物素化抗体、以增大抗体结合量，达到放大效果。 * 蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室。 * 紧接着，蠕动泵加入TPA，电极加电压，启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，其与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测Ag的含量。 * 终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。 * 项目最多。CA72-4 、Cyfra21-1、NSE为特有项目。 CA72-4 为胃肠道和卵巢癌的肿瘤标志，与CEA检测有互补作用，与CA125联合检测，作为原发性及复发性卵巢肿瘤的诊断依据，两者均阳性时，特异性可达100%。 NSE可用于神经母细胞瘤诊断和预后，肺癌的诊断和分型，其它如嗜铬细胞瘤，甲状腺髓样癌、黑色素瘤等。 Cyfra21-1检测对非小细胞肺癌的诊断具有重要价值，尤其是对鳞状细胞瘤的诊断、疗效观察、预后监测有重要意义 HCG是睾丸癌、非精原细胞癌、膀胱癌的指征 * DHEA-S、 SHBG 仅罗氏与德普有 * * 强项，不断发展新项目，如碱性磷酸酶、降钙素、活性VitD * 化学发光酶免疫分析法 碱磷酶（AP）标记的CLIA 代表公司：DPC 经典机型：IMUULITE 2000 原理：塑料珠为载体 碱磷酶标记， AMPPD为发光底物 * 3. 电化学发光免疫分析 （ECLI） 应用电化学发光的底物三联吡啶钌作为标记物，标 记方法是将其衍生物N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯通过化学反应与抗体或不同化学结构的抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与ELISA相似，分两个布骤进行。以双抗体夹心法测定抗原为例，第一步在试管中进行，反应物为Ru(bpy)2+3标记的抗体、吸附在磁性微球上的固相抗体以及受检的标本。 * 反应后除由标记抗体、固相抗体与标本中的抗原形成的夹心复合物外，尚有多余的标记抗体和固相抗体。随即用含三丙胺（TPA）的缓冲液冲洗。反应室电极下有磁铁。含磁性微球的夹心复合物及游离的固相抗体被吸附在电极表面，游离的标记抗体随冲洗液流出。此时在反应室中即发生电化学发光反应。发出的光由光电倍增管转为电信号，通过电信号的测定反映标本中抗原的含量。 * 电化学发光免疫分析示意图 * 电化学发光免疫测定示意图 * 标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 * * ECLI检测流程图一（双抗体夹心的形成） * ECLI检测流程图二 （生物素与亲和素结合） * ECLI检测流程图三 磁珠吸引吸附于电极表面） * ECLI检测流程图四 （电极充电启动电化学反应） * ECLI检测流程图五 （撤消磁场冲洗磁珠） * 试剂盒实样 * 优 点 1、标记物可循环利用，发光时间更长、强度更高易 于测定 2、敏感度高可达pg/ml或 pmol/ml 3、线性范围宽，＞104 4、反应时间短，20min以内完成测定 5、试剂稳定性好 * 电化学发光 电化学发光免疫分析（Electro-Chemiluminescence Immunoassay，ECLIA）：三丙胺(TPA)与发光化合物三联吡啶钌组合，作为化学发光物质建立电化学发光免疫分析。在电极表面由化学反应引发的特异性化学发光反应，包括了电化学和化学发光两个过程 代表公司：罗氏诊断 经典机型：1010 2010 E170 cobas e411 E601 原理：顺磁性微粒做载体 （生物素-亲和素偶联技术） +电化学发光技术； 夹心法和竞争法 2010 * 三、时间分辨荧光免疫分析技术（time-resolved fluoroimmunoassay） 时间分辨荧光免疫分析采用稀土元素标记抗体，利用时间分辨荧光仪特定的延迟时间测量，获得稀土元素的特异荧光信号，同时消除非特异性荧光物质的干扰。 * （一）标记物为具有独特荧光特性的稀