响应面优化脂肽生物合成条件实验方案1.doc

课题 响应面优化枯草芽孢杆菌生产生物表面活性剂lipopeptide发酵条件 一、测定方法 popeptide concentration 对0~500 mg/L脂肽溶液质量浓度与表面张力进行线性回归,得线性回归方程:y=-0.073 8x+71.257,线性相关系数R2=0.996。可见脂肽质量浓度与表面张力有良好的线性关系,可以通过表面张力表示脂肽含量。（张凡,佘跃惠.排油圈法对生物表面活性剂的定性与定量[J].化学工程师, 2005(1):14-16.） 2 生物量的测定 将全培养液于3000r/min离心20min,离心菌体用无菌水冲洗后再次离心,冲洗两遍溶解于相同体积的蒸馏水中,稀释10倍后(稀释倍数可能会有变化),在580nm下测得吸光度值,用OD580表征生物量,每个样品测定三次（结果为测定结果乘以稀释倍数）。刘佳,黄翔峰,陆丽君,等响应面法优化Alcaligenes sp.产脂肽生物破乳剂培养基的研究[J]. 工业微生物,2008,38(5):40-44 3 表面张力测定 拉脱法环脂肽生产菌株Bacillus subtilis Ow-097生物合成条件[J]. 江苏调味副食品, 2009(03):11-15,21X1 x-1 x+1 1 6 酵母粉 % X2 x-1 x+1 0.04 0.08 发酵时间 h X3 x-1 x+1 24 48 pH X4 x-1 x+1 7.0 9.0 接种量 % X5 x-1 x+1 2 6 装瓶量 xml/300ml X6 x-1 x+1 50 100 2 爬陡坡试验 表4 最陡爬坡试验* 序号 步长 可溶性淀粉(x1) 酵母粉 (x2) 装瓶量 (x3) 接种量(x4) 脂肽产量ug/ml 1 x 5 0.06 90 5 2 x+Δxi 6 0.08 100 6 3 x+2Δxi 7 0.10 110 7 4 x+3Δxi 8 0.12 120 8 5 x+4Δxi 9 0.14 130 9 6 x+5Δxi 10 0.16 140 10 *要确定原点数值和步长quadratic rotatable central composite design) 实例如下 CCD中的r计算实例 一般地，设有p个因素Z1,Z2,…，Zp，其指标y在一定的范围内可近似地用二次函数描述，则其二次回归正交组合设计可按下述方法进行： (1)确定各因素的变化范围。以Z1j和Z2j分别表示因素Zj(j=1,2,…,p)变化的上限和下限，并用下式计算各因素的零水平(Z0j)和变化区间(△j)： (1) (2)对每个因素的水平进行编码，编码时线性变换按(1)式 ????进行。 需要指出的是在这里因素Zj的上下水平对应的不是+1和-1 ，而是和 ，每个因素也不是三个水平，而是以下五个水平： Z1j和Z2j分别表示因素变化的上限和下限因素Zj的上下水平对应的不是+1和-1而是和 所以： (张秋华,张敏,张亚丽. 二次回归正交旋转组合设计优化单细胞蛋白饲料的研究[J].饲料工业,2009,30(17):20~23)