研究肝癌中NET-1基因与p27及其磷酸化降解分子的相关性8.ppt

研究肝癌中NET-1基因与p27及其磷酸化降解分子的相关性及对癌预后的影响;; NET-1与NET-2到NET-7一起统称为NET-X，它们是由Serru等于2000年在EST 数据库中发现的7 个新的含4 次跨膜蛋白超家族( transmembrane 4 superfamily 或tetraspan family, 简称TM4SF) 的成员。 ; p27作为细胞周期重要负性调控因子，受多种因素调控。细胞外信号调节激酶(ERK) 是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中一条主要和经典的并与人类癌症关系最为密切的途径，p27蛋白是ERK信号通路下游的重要分子。p27的基因突变非常罕见，对p27的功能调控主要发生于转录后阶段，通过蛋白磷酸化修饰来发挥其生物学效应。p27分子内存在数十个潜在的磷酸化位点，其中以N端第10位丝氨酸（S10）及C端第187位苏氨酸（T187）最为重要，占p27蛋白总磷酸化水平70%以上。p-p27T187可启动S期激酶相关蛋白2（Skp2）分子介导的p27多聚泛素化及随后降解 。有证据显示JAB1与p27的出核转运有关。它能够促进p27从胞核向胞浆的移位，加速p27泛素蛋白酶体途径的降解 。;1、构建重组表达质粒 NET-1siRNA、myc-NET-1和 pEGFP-myc-p27 (WT) 。 2、细胞培养与转染 3、Western blot检测蛋白表达 4、免疫共沉淀分析NET-1与p27的相互作用关系 5、免疫组化检测 6、临床病例与预后分析;二、结果;;;;;NET-1在HCC、癌旁组织和血管瘤旁肝组织中表达呈递减趋势，不同组间的差异均有显著的统计学意义。JAB1、p-p27T187、p-p27S10和PCNA在HCC中表达显著高于癌旁组织和血管瘤旁肝组织，但后两组间差异无显著统计学意义；p27在癌旁组织和血管瘤旁肝组织中表达显著高于HCC中，但前两组间差异无显著统计学意义。 ;(1) NET-1与p27Kip1的表达呈负相关(r =－0.6078，P 0.001) (2) NET-1与JAB1的表达则成正相关（r =0.6866，P 0.001） (3) NET-1与PCNA的表达则成正相关（r =0.5645，P 0.001）;（1） Log-rank单因素分析 影响预后的因素： 癌淋巴结转移与NET-1、p27、PCNA、p-p27T187 p-p27S10表达。;（2）Kaplan-Meier生存曲线 ;（3）Cox比例风险模型多因素生存分析;;; ; Thank you ！;E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-wt!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)wt!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-wt!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)ws!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)ws!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)vs!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)vs#pXlUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-wt!pYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)wt!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)ws!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)vs!pXmUiRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPd