色谱分析法251页课件.ppt

Section 10.1 Principles of chromatography 10.1 色谱法原理 Principles of Chromatography 1 概述 Overview 1903年,俄国植物学家兹维特分离植物色素； 后来出现了种类繁多的各种色谱法。 基本特点：具备两个相：固定相和流动相 固定相：Stationary phase 固定不动的相 流动相：Mobil phase 携带样品流过固定相的流动体。 当流动相中样品混合物经过固定相时，与固定相发生作用。由于各组分性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 色谱发展史上占有重要地位的英国人A.J. P. Martin(马丁)和R.L.M. Synge(辛格)，他们提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。1952年，因为他们对分配色谱理论的贡献获诺贝尔化学奖。 色谱法的特点：Features 分离效率高；分析速度快；检测灵敏度高；样品用量少；选择性好；多组分同时分析；易于自动化。 定性能力较差。 A.J. P. MARTIN 和R.L.M. Synge 色谱法的发展历史 Developing history 色谱法的诺贝尔奖研究工作 Nobel prizes 微观分离过程Microcosmic separation process 色谱法分类 Classification (1) 按两相状态 According to states of two phases A. 气相色谱(GC): 气体为流动相 根据固定相是固体吸附剂还是固定液又可分为气固色谱(GSC)和气液色谱(GLC) B. 液相色谱(LC): 液体为流动相 分为液固色谱(LSC)和液液色谱(LLC) C. 超临界流体色谱(SFC): 超临界流体为流动相 随着色谱的发展，通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）。 (2) 按分离机理分类  According to separation mechanisms 吸附色谱法：Adsorption chromatography 组分在固定相上的吸附能力强弱不同而分离的方法。 分配色谱法：Partition chromatography 组分在固定液（固定相）中溶解度不同而分离的方法。 离子交换色谱法：Ion exchange chromatography 组分在固定相上的亲和力不同而分离的方法。 凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法： Gel chromatography or Size exclusion chromatography 大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而分离的方法。 亲和色谱法：Affinity chromatography 不同组分与固定相的高专属性亲和力进行分离的技术，常用于蛋白质的分离 。 (3) 按固定相的外形分类 According to shapes of stationary phases  固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。固定相呈平板状的色谱法，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 根据以上所述，将色谱法的分类总结于下表中。 2 色谱流出曲线及有关术语 Effusion curve and relate items 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线的线性范围内，色谱峰如果对称，可用Gauss正态分布函数表示： 式中：C—不同时间t时某物质的浓度，C0—进样浓度，tr—保留时间，σ—标准偏差。 (2) 基线 Base line 是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，即图中O—t线．稳定的基线应该是一条水平直线. (4) 保留值 Retention value A．死时间tM Dead time 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，如图中 O′A′。因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相的流动速度相近．测定流动相平均线速ū时，可用柱长L与tM的比值计算。 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，如图 O′B．它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间． C．调整保留时间