正交实验法优化紫草素的取工艺本科毕业论文.doc

引 言 紫草系紫草科多年生草本植物紫草、新疆紫草或内蒙古紫草的根。性苦寒无毒，入心肝经，有凉血活血、清热解毒、透疹的作用[1]。其主要有效成分为萘醌类紫草素[1]，其色泽鲜艳，无毒，无味，是食品、饮料、化妆品等理想的着色剂，也是纺织品理想的着色染料。 目前，国内外对紫草素的抗肿瘤作用研究较多，以天然紫草素化合物为原料，半合成了紫草素类衍生物。实验证明，其衍生物具有细胞毒作用和抗肿瘤作用。其作用机制研究表明，紫草素及其衍生物能诱导肿瘤细胞凋亡，激活促细胞分裂原激活蛋白激酶[2]，抑制蛋白酪氨酸激酶和DNA拓扑异构酶的活性，从而影响肿瘤细胞的代谢、增殖、分化、信号传递、基因表达等过程，阻碍肿瘤细胞的生长。另外，紫草色素在医药、化妆品和印染工业中的多种功用也引起了国外学者的广泛研究。紫草素有很强的抑菌作用，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等有明显的抑制作用[3]。紫草是非常有开发利用价值的天然资源。 本文通过正交实验法[4]研究紫草素的提取条件。为紫草素的广泛应用提供了参考依据。 1 实验材料 1．1 原料： 呼和浩特市万民大药房所购买的紫草药材 1．2 试剂： 乙醇（95%）,蒸馏水 1．3 主要仪器：TU-1800PC紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器设备厂） RE52-3旋转蒸发仪（上海沪西分析仪器厂） OHAUS电子精密天平(OHAUS上海公司) 广口瓶 圆底烧瓶 2 实验方法 2．1　提取溶剂的选择 紫草中的有效成分萘昆类色素多为酯类，脂溶性很强，能溶于石油醚、乙醇、苯等有机溶剂，因此这些有机溶剂在提取中作为浸提液被采用。从安全、经济以及浸提率上考虑，最终选定乙醇（95%）为浸提溶剂[5]。　 2．2 　紫草素的提取方法 将紫草药材剪碎，置于广口瓶中，用95%乙醇溶剂浸泡紫草，做两组平行实验。浸泡一段时间后，用双层纱布过滤，得到提取液。 2．3 紫草素的定量检测方法 将上述所得提取液取0.2ml，用95%乙醇溶液定容至10ml，以95%乙醇溶液做空白，在紫草素最大吸收波长520nm处测定吸光度[6]。 3 　 结果与讨论 3．1　浸提温度对紫草素提取的影响 据文献[7]紫草素的变性温度是70℃，所以选择在20℃～70℃范围，在浸提时间24h和浸提比1:20的条件下，提取紫草素。在520nm处检测紫草素含量来考察浸提温度对提取紫草素的影响，结果见表1： 表1 浸提温度对紫草素提取的影响 由表1可知，在浸提时间24h和浸提比1:20的条件下，一定温度范围内，随着浸提温度的升高，提取液的吸光度增加， 40℃时达到最大值为0.694，温度超过40℃吸光度开始降低，说明在一定的温度范围内，升高温度有利于紫草素的提取；但温度过高可能导致紫草素稳定性下降，使吸光度下降。所以本试验得出提取紫草素的适宜温度为40℃。 3．2 浸提时间对紫草素提取的影响 在浸提温度40℃和浸提比1：20的条件下，提取紫草素。在520nm处检测紫草素含量来考察浸提时间对提取紫草素的影响，结果见表2： 表2 浸提时间对紫草素提取的影响 　　由表2可知，在浸提温度40℃和浸提比1：20的条件下，随着浸提时间的增加，提取液的吸光度增加，可见延长浸提时间有利于紫草素的提取，24h时吸光度达最大，最大值为0.631，所以提取紫草素的适宜时间为24h。 3．3 浸提比对紫草素提取的影响 在浸提温度40℃和浸提时间24h条件下提取紫草素，在520nm处检测紫草素含量来考察浸提比对紫草素提取的影响，结果见表3： 表3 浸提比对紫草素提取的影响 由表3可知，在浸提温度40℃和浸提时间24h条件下，一定的浸提比范围内，随着浸提比的增加，提取液的吸光度增加，在1：20吸光度达最大为0.604，超过1：20吸光度开始降低，可能由于紫草素在1：20时已经提取完全，随着浸提比的增加，溶剂量也随之增加，提取液的浓度降低,相应的吸光度下降，由此可见提取紫草素适宜的浸提比为1：20。 3．4 正交实验设计 通过上述单因素试验可确定正交实验水平见表4： 3．4．1 因素水平的确定 表4 因素水平