实验一 植物细胞有丝分裂制片和观察.doc

实验一　　植物细胞有丝分裂制片和观察 一、实验目的与要求 1.实验目的：理解植物有丝分裂各个时期规律性的变化；掌握植物细胞有丝分裂的制片技术；学会用显微镜观察植物细胞染色体在不同分裂时期的分裂相及其特点。 2.实验要求：必做实验。 二、实验类型 本实验为验证型实验。 三、实验原理及说明 生物在体细胞产生体细胞的过程中，主要采用有丝分裂方式。母细胞将核内的染色体均等地分配给子细胞，母细胞的染色体数目与子细胞一致，因为分裂过程中可形成纺锤丝，故称为有丝分裂。染色体在细胞分裂的间期、前期、中期、后期、末期具有不同的行为。在此过程中，细胞核和细胞膜也呈规律性变化。各种分裂旺盛的组织经过适当的取材处理，加以固定、离析、染色、压片，可以迅速将细胞分散在载片和盖片之间，进行有丝分裂和染色体观察。 四、实验仪器 序号 仪器名称 台数 1 显微镜 20 2 培养箱 2 五、实验内容和步骤 1.准备 （1）材料准备：将小麦种子放在盛满水的烧杯中浸泡24h后，倒掉水分。将一张浸湿的滤纸放入培养皿中，然后再放入种子，上面盖上另一个培养皿，置于25℃下培养。待长出根尖0.5-1厘米后，在上午10：50细胞处于分裂高峰期，用刀片取下，放在广口瓶中，进行预处理。 （2）用具：眼科镊子，刀片，广口瓶，解剖针，盖玻片，大培养皿，小培养皿，立式染缸，染色板，酒精灯，量筒100毫升、10毫升。 （3）所需药品及配制 ：无水乙醇，二甲苯，醋酸洋红。 2.预处理：用0.05-0.2%秋水仙素处理根尖，2-4h。 3.固定：用Carnoy固定液(卡诺固定液 ，冰醋酸：95%酒精=1：3）固定2-24 h，再放在95%、85%、75%酒精中各0.5 h，最后在70%的酒精中保存2个月。一般是新固定的材料为好。保存在乙醇里的材料，在观察前最好用Carnoy固定液再固定1-2 h。 4.水解：将固定材料加一滴离析液（95%乙醇：浓盐酸=1：1）离析10 min，然后用水反复冲洗，材料为白色，用针易压碎。 5.染色：在载片上滴一滴醋酸洋红染色15 min左右，待根尖为暗红色时，将染色后的根尖放在一清洁的载片上，去除根冠和伸长区，再加少量染液染色。 6.分色：在染好的根尖上加一滴45%的醋酸分色，使细胞质变浅，染色体清晰。 7.压片：以双层吸水纸覆在盖片上，左手按住按住盖片，右手拇指用力压片；或用一个双面刀片插到载片和盖片之间的一角，然后用解剖针柄轻敲盖片，然后将刀片撤出，再用针柄种敲盖片，细胞很容易散开（注：用力适当、均匀，防止盖片破坏、滑动）。然后在酒精灯上过3-4次。加盖片附以吸水纸压片。 8.镜检和烤片：先用低倍镜显微镜下检查有丝分裂四个时期典型特征的细胞，再转到高倍镜进行观察。 若染色过深，片子不请，可以烤片。方法是让片子在火焰上过几次，以盖片上的水气刚消失为止，不可沸腾。烤片时应将片子不断在手背上试温，以不烫手为宜，反复镜检。 六、实验数据处理与结果分析 1.通过实验观察绘制植物有丝分裂各个时期的分裂图象。 2.总结各个时期的特点： （1）间期：细胞核看不到染色体结构， DNA在间期进行复制合成。 （2）前期：染色体开始缩短变粗。在动物和低等植物细胞中，核旁的两个中心粒向相反方向移动而形成纺锤体。高等植物细胞内看不到中心粒，但仍可看到纺锤体的出现。前期快结束时，核仁逐渐消失，最后核膜也崩解。 （3）中期：染色体排列在赤道面上，染色体的两臂分布在细胞的空间内。染色体纺锤丝连接起来。 （4）后期：每一染色体的着丝粒分裂为二，被纺锤丝拉向两极，染色单体也跟向两极移动，形成两条单染色体。 （5）末期：染色体到达两极，染色体的螺旋结构逐渐消失，出现核的重建过程，两个子核的膜重新形成，核仁重新出现，纺锤体消失。 （6）胞质分割：两个子核形成后，植物细胞由两个子核中间残留的纺锤丝先形成细胞板，最后成为细胞膜，把母细胞分隔成两个子细胞，到此一次细胞分裂结束。 七、注意事项 1.根尖解离的时间适宜。 2.取材部位要准确，只有分生区才有分裂相。 3.取材要少，有利于着色和细胞分散。 八、预习与思考题 1.预习显微镜的使用方法；复习有丝分裂各个时期的特征。 2.思考题 （1）观察植物细胞有丝分裂时，取材应注意什么问题？ （2）固定液的作用是什么？在使用固定液时应注意什么问题？ （3）绘制小麦根尖有丝分裂各个时期的图象。 （4）根据你的实验操作情况，谈谈如何制备一张优良的片子。