猪肌细胞生成素基因的多态性对荷包猪肉质的影响的研究.doc

猪肌细胞生成素基因的多态性对荷包猪肉质的影响研究 时间：2011-09-23 来源： 作者： 摘? 要：本试验选择100头100日龄的育肥荷包猪作为试验对象，采用PCR-SSCP技术对肌细胞生成素（MyoG）基因的遗传多态性进行分析，并研究基因型与荷包猪肉质的相关性。结果表明：在MyoG基因外显子Ⅰ（exon1-1）位点上存在多态性。MyoG基因的多态性对荷包猪和长白猪的肉质指标有较大影响，且达到了显著水平。??? 关键词：荷包猪；MyoG基因；PCR-SSCP分析；肉质??? 荷包猪是东北民猪的一种，主要分布在辽宁、吉林和黑龙江3省。全身黑色，冬季生绒毛，鬃毛质量好，体质强健。面长直，耳大下垂。背膘平或微凹，胸深，四肢粗壮，卧系。后躯狭窄，倾斜。抗寒能力强，适应性强，耐粗饲，善奔跑，常年发病率低，肉质鲜美。??? 肌细胞生成素（Myogenin，MyoG）是调节骨骼肌发育的重要因子，MyoG是生肌决定因子（Myogenin determination gene，MyoD）基因家族的成员之一。而生肌决定因子MyoD（也称肌肉调节因子muscle regulatory factory，MRF）基因家族编码4个明显不同的肌肉特异性转录因子：MyoD、MyoG、Myf5和MRF4，他们代表着控制骨骼肌生成很多方面的关键调节因子。其中，MyoG基因是MyoD 基因家族中唯一在所有骨骼肌细胞系中均可表达的基因，起到关键调节的作用。目前，国外对猪MyoG基因的多态性进行了较多研究，例如，Ernst等（1998）首先分析了猪MyoG基因的遗传变异，他们发现长度为4.9kb和4.2kb DNA片段为多态性片段，又在4个二代家系和三代家系中发现含4.9kb和4.2kb片段的MyoG等位基因分离符合孟德尔分离定律。对8个品种无亲缘关系的83头猪的MyoG等位基因的频率进行检测，发现含4.9kb和4.2kbDNA片段的MyoG等位基因出现频率分别为0.42%和0.58%。TePas等（1996）发现MyoG基因有3个变异位点：一个为梅山猪所特有，一个为荷兰长白猪和杜洛克猪所特有，另一个为所有研究的猪种共有的变异位点；初步研究表明这些变异位点与猪初生重、肌纤维数有关。近些年来，随着对猪MyoG基因的研究的不断深入，已经取得了一些新进展。MyoG基因作为改善猪肉类品质重要的候选基因，我们有必要对其进行深入研究。??? 1 材料与方法??? 1.1 材料??? 本试验所用优质纯种荷包猪和长白猪均由葫芦岛市建昌县民盛荷包猪养殖场提供。采用耳静脉采血。所有的试验猪均采血2mL左右。将血液放入有10%EDTA抗凝的离心管中并分别编号。采用PCR-SSCP技术分析，对所有试验猪进行MyoG基因型的检测，然后选取体重大约在75kg的各个基因型纯种荷包猪进行试验。??? 1.2 引物的设计??? 本次试验引用（Ann Soumillion，等，1996）年设计的引物，由沈阳宝泰克生物工程有限公司合成提供。引物序列为：??? 引物1，R1:5’-GGA ATT CCA TGG AGC TGT ATG AAC ATC-3’??? F2:5’-TCC GGC TCC TCC CTG GTT GA-3’??? 引物2，R1:5′-TCA GGA AGA ACT GAA GGC TG-3′??? F2: 5′-GTT TCC TGG GGT GTT GC -3’??? 1.3 PCR-SSCP 分析??? PCR扩增体系50μL。扩增条件：预变性温度为93℃、3min。变性93℃、35S，退火温度为61℃、30S。72℃延伸30S。??? 取PCR产物，加入变性剂、石蜡油，煮沸5min，取出立刻放入冰浴中8min以上，再全部上样，10～15℃（具体温度依试验而定，不能太高）下电泳。开始在220V电压下电泳10min，然后在140V（电压不能高于120，否则有可能使条带跑弯）电泳12h，取下凝胶，进行银染，最后进行数码照相。??? 2 试验结果??? 2.1 PCR扩增结果 图1 MyoG exon1-1（1）的PCR扩增结果（bp） 图2 MyoG exon1-1（2）的PCR扩增结果（bp） 2.2 PCR-SSCP的检测结果 图3 MyoG SSCP的检测结果 ??? 图3中，PCR扩增产物的SSCP检测结果：4、6、7、10为AA基因型；1、2、5、8为AB基因型；3、9为BB基因型。??? 2.3 结果统计??? 由表1可知，MyoG基因的多态性对荷包猪滴水率的影响未到达显著效果（P0.05）。??? 对嫩度的影响达到了显著水平（P0.05）。AA型基因的嫩度值最大，AB型基因的嫩度最小，BB型基因的嫩度介于