实验室十三 琼扩实验 类实验室诊断技术课件.ppt

鸡马立克氏病实验室诊断 二、实验步骤 2、打孔 将琼脂板放在预先印好的梅花形图案上，用打孔器按图形准确位置打孔，孔径为3~4mm，孔距均为3mm。然后用16#针头挑出孔内琼脂，并用记号笔在周围孔上标记1、2、3、4、5、6。 二、实验步骤 4、加样 向中央孔加马立克阳性血清，向周边1、4孔加标准马立克琼扩抗原作对照，向周边2、3、5、6孔加待检羽髓浸液。 注：羽髓浸液制备：选拔受检鸡含羽囊丰满的羽毛10根以上，将带有羽髓的毛根剪集于小试管内，每管加入0.5毫升生理盐水，用玻璃棒将羽毛根压集于管底，以适当压力转动玻璃棒10多次，待浸提液混浊后，用吸管将其移入外周孔内。 三、结果判定 1．阳性：如果中央阳性血清孔与周边羽髓孔之间出现一条清晰致密沉淀线，即为阳性。一般每只受检鸡采6根血羽，其中若有一根血羽出现沉淀反应，则制定该鸡为阳性鸡。 2．阴性：当中央阳性血清孔与周边羽髓孔之间不形成沉淀线者，则判为阴性。 鸡传染性腔上囊病血清抗体效价检测 二、实验步骤 1、 琼脂糖平板制备 2.打孔 3.封底 4.加样 中央孔滴加法氏囊标准琼扩抗原，周边第1孔加阳性血清作对照，第2、3、4、5、6孔滴加不同稀释倍数的血清（不稀释、2倍、4倍、8倍、16倍稀释）。 三、结果判定 出现沉淀线的血清最大稀释倍数，即为该血清的抗体效价。 琼脂扩散试验 原理 抗原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中可以向四周自由扩散，当抗原、抗体扩散至适当部位相遇时，则出现肉眼可见的沉淀线，这就是抗原、抗体的特异性结合物。 反 应 原 理 在生产中的应用 1、用于诊断疾病 即用已知的抗体测定未知的抗原，如马立克病的诊断。 2、测定血清中的抗体效价 即用已知的抗原测定未知的抗体，如雏鸡体内法氏囊母源抗体的检测。 一、实验器材 打孔器、16#针头、打孔纸样、记号笔、酒精灯、微量移液器、湿盒、培养箱、优质琼脂粉、氯化钠、蒸馏水、已知鸡马立克氏病阳性血清、已知鸡马立克氏病标准抗原、被检鸡的羽囊等。 二、实验步骤 1、 琼脂糖平板制备 1~1.5g琼脂粉+8gNacl+100ml蒸溜水，加热溶化；倒平皿，厚度为3~4mm；平置，在室温下凝固冷却（夏天适当增加琼脂糖浓度，但不能超过1.5%）。 二、实验步骤 3、封底 将平皿底部在酒精灯火焰上微微加热，使孔底琼脂糖稍微融化。 二、实验步骤 5、放入湿盒 将琼脂平皿置湿盒内，于37℃温箱，扩散48～72h后观察结果。 一、实验器材 打孔器、16#针头、打孔纸样、记号笔、酒精灯、微量移液器、湿盒、培养箱、琼脂糖平板、已知法氏囊标准抗原、待检血清、生理盐水。 四、注意事项 1、琼脂糖平板应放在4℃冰箱中充分冷却后再打孔为佳。 2、琼脂用打孔器打孔后，一定要用对孔的底部进行封口，以防孔内物质渗漏。　 3、向孔中滴加样品时，均以加满而不溢出为度，否则会影响反应效果。　 五、实验作业 1、写出琼扩试验的操作方法及结果判断。 2、琼脂扩散试验的应用价值如何？操作时应注意哪些事项？