实验四培养基的备与灭菌.ppt

实 验 四 微生物培养基的配制和灭菌 微生物培养基的配制和灭菌 目的要求 实验材料 实验程序 目 的 要 求 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 实 验 材 料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。 其它：天平、牛角匙、电炉、2M HCl、2M NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。 实 验 程 序 培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌方法 实验程序1:培养基的配制 培养基 培养基的配制原则 培养基的种类 培养基的配制方法和步骤 培养基的配方及配制 无菌水的制备 培养基的配制原则 一、营养成分 二、pH值 三、渗透压 四、氧化还原电位 三、渗透压 注意营养物质要有适合的浓度，不能太低满足不了生长的需要，太高则渗透压太大，也会抑制微生物的生长 四、氧化还原电位 氧化还原电位越高，培养基的氧化活动越强，在厌氧菌培养中，加入还原剂，可降低自由氧的毒害。 培养基的种类 据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂（常用凝固剂为琼脂）的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 培养基的配制方法和步骤 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用2MNaOH或2MHCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 培养基的配方 糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖） 蛋白胨水培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基 柠檬酸盐培养基（斜面） 牛肉膏蛋白胨培养基（斜面、三角瓶）） H2S培养基 淀粉培养基 （三角瓶） 高氏培养基 （三角瓶） H2S培养基 蛋白胨：10g 胱氨酸：0.1g Na2SO4 ：0.1g 水：1000ml PH ：7.2 滤纸条若干，浸于8%醋酸铅液，取出吹干，分装入试管，灭菌。 注意事项 培养基配方在附录Ⅱ 按照每组的安排来配制，每人配的不一定都相同 按照书上的比例，但总量有变（所有配方均为1000ml量，同学们需要根据不同要求换算） 配溶液 调pH值 加琼脂粉 灭菌 （在老师监督下进行） 普通微生物培养基配制可以使用自来水，在细胞培养以及分子试验中需要区别对待 实验程序2:分离培养微生物常用器皿的准备 清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等。 棉塞的制作 包装培养皿和吸管等。 实验程序3:培养基和玻璃器材的灭菌方法 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 加压蒸汽灭菌法 其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。2.接通电源，进行加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气