实验一 花粉生活力的测定 园植物育种学课件.ppt

实验一 花粉生活力的测定 实验目的 1 学会并掌握用形态法、染色法、发芽法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。 【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。 通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为确定花粉生活力高低的标准。 【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、Na2HPO4·2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。 【实验方法与步骤】 鉴定花粉生活力的方法有很多，概括起来不外下列几种：一是将待测花粉直接授粉，最后计算结实数和结籽数；二是将花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下观察花粉萌发情况，测定萌发率；三是形态观察；四是染色观察；五是在人工培养基上播种花粉，观察萌发率。 1 形态观察法 一般把具有品种典型性的花粉（指具有该品种花粉粒的大小、形态和色泽等）作为具有生活力的花粉，把小型的、皱缩的、畸形的作为无生活力的花粉。 形态观察的具体方法是：首先将花粉置于载玻片上，在显微镜下查看三个视野，要求被检查的花粉粒总数达100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。此法简便易行但准确性差，通常只用于测定新鲜花粉的生活力。 2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成TTF而成红色。 （2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置不同含糖量的培养基，进行比较试验）。注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀，有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。 【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力高低的结果分析。 * *