非结核分支杆菌病的诊断与处理.ppt

用PCR-RFLP法鉴定脓肿分枝杆菌和龟分枝杆菌 细菌 抽提基因组DNA PCR法扩增16s-23srDNA部分序列 脓肿 龟 Hae Ⅲ酶切 Taq I酶切 230bp 230bp 200bp 30bp 110bp 120bp 230bp Hae Ⅲ酶切的电泳结果 M为DNA marker, 第1列为生化法初步鉴定为龟分枝杆菌的菌株(即上图中的第7列菌株），再经全套生化法鉴定实为偶然分枝杆菌，第2列为脓肿分枝杆菌标准株，其余为脓肿分枝杆菌临床株 Taq I酶切的电泳结果（一） M为DNA marker。第1列为脓肿分枝杆菌标准株，其余为脓肿分枝杆菌临床株 Taq I酶切的电泳结果（二） 注：M为DNA marker。1、2列为经生化法鉴定为龟分枝杆菌的临床株，3、4列为龟分枝杆菌标准株，第5列为脓肿分枝杆菌标准株 PCR扩增细菌DNA的某个特异片段，直接测定DNA碱基序列，分析分支杆菌种间序列差异,可达到分支杆菌菌种鉴定的目的 DNA测序是检测DNA分子差异的最可靠方法 PCR-DNA测序 65000蛋白 编码基因 rPOB 基因 16S-23S rDNA DNA探针 DNA 探针是能识别特异核苷酸 序列的带标记的一小段DNA分子 DNA杂交 DNA探针杂 交简易图 DNA探针杂 交简易图 正向杂交 反向杂交 待检DNA DNA探针 DNA探针 待检DNA 正向杂交须先将PCR 产物固定,再与检测探针进行杂交,这样就要对每个标本的扩增产物进行固定,增加了操作步骤 反向杂交则预先将检测探针固定在尼龙膜上,再与变性的带有生物素标记的PCR 扩增产物。探针的固定在检测操作前就可准备好, 从而使操作明显简便、省时,适于大样本的检测, 16S-23SrDNA内转录间隔区序列寡核苷酸探针 鉴定分枝杆菌菌种的研究 李国利,等. 中国防痨杂志, 2002.10,24(S1):12-14 分子生物学诊断的优点 快速：2-3天 准确 灵敏度高 检测成本较高； 需要昂贵的仪器设备； 可能有假阳性； 操作复杂，要求高； 分子生物学诊断的缺点 治疗现状 ☆无特异高效的抗NTM药物 ☆抗结核药物仍在使用，但效果不佳☆NTM细胞表面的高疏水性及细胞壁 通透屏障： ——是其广谱耐药的生理基础 ——是有效化疗的障碍 治疗进展1 · 疏水衍生物：利福布丁（Rifabutin,RFB） 等 · 破坏细胞壁：如乙胺丁醇(EMB) · 克服细胞壁通过障碍：如将抗结核药物加 入脂质体 · 多种机制不同的药物联用：如EMB、链霉 素（SM）、利福平（RFP）、环丙沙星 （CIP）等联用 治疗进展2——新药研制 利福类：RFB、利福喷丁(Rifapentin,RPE)、苯恶嗪利福 霉素1648(KRM~1648) 氟喹诺酮类（FQ）：司帕沙星(Sparfloxacin,SPFX)，莫 西沙星（Moxifloxacin)，乙胺沙星（Ct 934） 新大环内脂类：克拉霉素（Clarithromycin, CTM）， 阿齐霉素 (Azithromycin,ATM) 头霉素类：头孢西丁(Cefoxitin,CXT)，头孢美唑 (Cefmefazol,CMZ) 碳青霉烯类：亚胺培南(Imipenem,IPM)等 噁唑烷酮类（oxazolidinone）：利奈唑胺（Linezolid） 治疗进展3——老药新用 ⊙磺胺类：磺胺甲恶唑（Sulfamethozole,SMZ） 复方磺胺甲恶唑（TMP/SMZ,SMZco） ⊙四环素类：强力霉素（doxycycline,DCC） 米诺环素（Minocycline,MOC） ⊙氨基糖苷类：妥布霉素(Tobramycin,TOB) 阿米卡星（Amikacin,AMK） 治疗注意：药物敏感试验，联合治疗，个体化方案，疗程18~24个月，至少12个月。 鸟分枝杆菌复合群病 包含ATM(500 mg，1次/d)或CTM(500 mg，2次/d)在内的两种或两种以上药物 EMB(15 mg.kg-1.d-1)可作为次选药物。 第二、第三或第四线药物 ：氯法齐明（CLO，100 mg，1次/d），RFB(300～600 mg），1次/d；也可使用利福喷汀RPT，环丙沙星(750 mg，2次/