土壤中寄生虫卵检测.PPT

土壤中寄生虫卵检测 河南省疾病预防控制中心 蔺西萌 国家级土源性线虫监测点 –淮阳 2008年随机抽取10户，分别从厨房、院子、厕所和菜地四个地点分别采取至少50g土样，分别保存备检。结果显示：在所采的10户共40份标本中，仅1份查到人受精蛔虫卵的存在（2.5%）；两份犬蛔虫卵阳性（5%）；且有5个土样中查出螨卵（12.5%）。 国家级土源性线虫监测点 –淮阳 2009年结果显示：在所采的10户共40份标本中，2份查到人受精蛔虫卵（5%）。1份标本发现犬蛔虫卵阳性（2.5%），另有3分标本发现螨虫卵（7.5%）。 直接镜检法 是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形态，以鉴别其死活。 鉴别受精卵和未受精卵。 鉴别有生活力和失去生活力(变性卵)的受精卵和含有幼虫卵的形态。 活的受精蛔虫卵的形态： 蛋白质壳为黄褐色，脱去蛋白质壳的为无色透明；平均大小为50～70×40～50μm；外层卵壳厚，内层壳薄，有屈光性，最外层的蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突起；卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间，有半月形的空隙，卵内的卵黄颗粒清晰而致密。 死活蛔虫卵形态 死受精蛔虫卵细胞移向一端，致使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙。 卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵。 卵细胞颗粒减少或消失。 卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色。 卵细胞向不定部位呈球状收缩。 卵壳的一侧或两侧，一端或两端向内凹陷或破裂。 只有蛋白质壳，而缺内容物。 含有死幼虫卵的形态 幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体感，镜检时注视之，久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动；强压时，虽能挤出幼虫，但也不改变其原来的卷曲状态。 美蓝、伊红、硼砂染色法 配制 将0.2g美蓝加入100ml蒸馏水中煮沸10分钟，加入硼砂0.5g，再煮沸10分钟，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用，pH值为10～11，在室温中可放置1.5年。 培养法 6、培养一个月后自皿中取出小滤纸片，将虫卵置于载玻片上，滴加50％甘油溶液，使其透明后，根据形态，鉴定卵的死活。凡含有幼虫的，都认为是活卵，其他阶段的或单细胞的，都判为是死卵。 23. 内含物变形死受精蛔虫卵 24. 卵壳内幼虫变形的死受精蛔虫卵 正常发育过程中蛔虫卵-活受精蛔虫 1.单细胞期活受精蛔虫卵 2.二细胞期活受精蛔虫卵 3.四细胞期活受精蛔虫卵 4.多细胞期活受精蛔虫卵 5.桑椹期卵（卵胚一端透明有光泽） 6.蝌蚪期卵（卵胚的一部分凹陷） 7.仔虫期卵（可见幼虫呈8字状运动） 8.不均等发育，卵内一部分发育为仔 虫期，一部分为蝌蚪期 死受精蛔虫卵 1.卵细胞颗粒化 2.卵细胞萎缩 3.卵细胞空泡化 4.卵细胞质的周边部透明化 原理 美蓝、伊红、硼砂染液（简称M.E.B）溶于水呈碱性。 活虫卵可以还原碱性染料，降低着色力，不易被染色。 死虫卵不能还原碱性染料，容易着色。 蛔虫卵外层蛋白膜容易被着色，染色前需脱去蛋白膜。 美蓝、伊红、硼砂染色法 步骤 1、脱蛋白膜 将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用数分钟，并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。 2、染色镜检 吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上，加M.E.B染色液一滴，上覆盖玻片，静置3～5分钟后镜检。或者，吸取虫卵沉淀物1滴放入小试管内，加入染色液染30分钟，再用蒸馏水洗2～3次，吸取沉淀物镜检。 3、注意 M.E.B的PH值应在10左右，不宜太高； 脱蛋白膜后，应洗净次氯酸钠，否则影响碱性染料的着色效果。 4、鉴别死活 活卵内含物不着色，死虫卵内含物染成蓝色。 图中箭头所指为死的蛔虫卵 1、在直径10～12cm的玻璃平皿底部平铺一层厚约0.5cm的脱脂棉； 2、在脱脂棉上铺一张直径与平皿等大的普通滤纸； 3、在滤纸上，再放一张直径2cm的小滤纸，将虫卵滴在小滤纸片上； 4、加入2%福尔马林液，以湿透滤纸和脱脂棉； 5、放入在28～30℃温箱中培养1个月观察虫卵死活。 培养法 * * * * 卫生部于2006 年在全国设立了22个土源性线虫病监测点开展监测工作 ,监测方案中要求对每个监测点进行人群土源性线虫病监测的同时, 还需监测土壤中人蛔虫卵的污染情况。 2006～2010年的监测数据显示，土源性线虫病监测点土壤中人活蛔虫卵检出率分别为25.8%，17.3%，19.0%，19.7%和14.7%，统计分析表明土壤人蛔虫卵检出率与人群蛔虫感染率呈正相关，因此土壤中蛔虫卵的污染情况是评价环境卫生状况的一项重要指标。 原理 采样 方法 注意事项 鉴别（受精与未受精、死活） 先用碱性溶液（ 5%氢氧化钠）与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵与土壤颗粒