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 基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护 卫生部临床检验中心 PCR热循环仪(DNA扩增仪)? 高速( 冷冻)离心机? 漩涡振荡混旋器 恒温水浴箱/恒温金属浴 洗板机(PCR-ELISA)? 酶标仪(PCR-ELISA) 加样器? PCR热循环仪(DNA扩增仪) PCR扩增仪的原理及发展状况: PCR扩增仪原理 国内常见扩增仪简介 国内常见荧光定量PCR仪简介 PCR扩增仪的使用与保养 (2)空气驱动循环恒温装置 本系统力求降低部件的成本,用空气作为热传导媒介。装置包括机箱(外壳)、热源、冷空气源、控制器和辅助电器元件等部分。 优点:不用金属的精密加工,成本降低。整个系统没有液体流动,不用致冷液,因而安全程度高。恒温精度可达?1℃ 。 缺点:单纯靠外部空气制冷,受环境温度影响。 (3)变温金属块作恒温装置 加热方式有电热发热、半导体发热,制冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多种方式。 国外产品的特点是产品质量和性能较稳定。 机型:适用,建议 8﹡12孔德模式。 国内常见扩增仪简介 T11-II型基因扩增仪(华美生物工程公司) 温度设定范围: 室温-99?C 样品批量能力:48?0.5ml或16?1.5ml离心管 动态显示内容: 实时温度、到计数时间、到计数循环数 主要功能:整机全自动化运行,线性运动臂同时具有自动和手动功能;具有断 电恢复功能;可贮存128个用户文件。 2400型DNA扩增系统( 美国应用生物系统公司) 最大样本数:可同时扩增3﹡8个0.2ml PCR反应管。 温度范围:4-99.9℃ 加热冷却速度:样本实际升降温速度平均为1℃/秒。 静态样本均衡性:?0.5℃,35-100℃范围。 温度精度:35-100℃间误差小于0.75℃。 特点:所附加热盖保证防止样品蒸发,无需加石蜡油操作,满足最小5?l体积;扩增反应的要求;可储存68个PCR方法,每个方法包括PCR前处理,保温,PCR循环及PCR扩增后保温条件;断电后有自动启动功能。 PTC-200 热循环仪(MJ公司产品) 最大样本数:多样本载板可选择,其中包括扩增96个0.2ml PCR反应管。 温度范围:-5-105℃ 加热速度:样本实际升温速度为3.5℃/秒。 温度精度:孔间温度差异小于0.3℃。 特点:采用可调压力和高度的热盖,防止样品蒸发,无需加石蜡油操作;三种温控选择:模块、样本内参或电脑模拟计算。 Eppendorf梯度PCR仪 最大样本数:是唯一可同时防置0.2ml和0.5ml反应管的扩增仪,可同时扩增96个0.2ml PCR反应管和77个0.5ml反应管。 温度范围:4-99℃ 加热速度:3℃/秒。冷却速度: 2℃/秒。 温度准确性: ?0.2℃ 。 特点:循环时可对变性、退火和延伸同时设温度梯度。 PCR扩增仪的使用与保养 PCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。 仪器应放置水平台上,电源电压须与仪器要求电压相一致,并连接可靠的地线。仪器远离水源、明火及腐蚀性物质。 工作室温要求:15-25 ℃,通风保证散热。 接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。 每次实验时,最好能将扩增仪内的孔位全部放置样品管,若样品管少时可用空管代替,以保证实验的一致性和重复性。 PCR扩增仪的使用与保养 实验结束后应及时擦干孔位内呆能存在的水分,盖上机盖。 应定期使用电子测温仪校准温度。 水浴式扩增仪应及时补充水,以免水量过少,影响温度稳定性。 定期清洁热盖和反应孔。 国内常见荧光定量PCR仪简介 GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 Lightcycler 荧光定量PCR系统 ABI 7000型荧光定量PCR仪 杭州博日 Line-gene GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 仪器特点 外标定量,熔点曲线分析。 5700采用基于CT值之实时动态荧光定量PCR方法,结果重复性好,线性范围广,可分别用于TaqMan 荧光探针技术作定量PCR和SYBR Green荧光染料作定量PCR。 一次最多可同时分析96个样品,荧光检测波长范围530-590nm。 GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 影响测定结果的因素 域值设定 光路维护 加样的准确性和反应体系的均一性 反应管中是否有气泡 反应管不符合荧光检测要求或疏水性差 反应管或反应槽被荧光物质污染 反应管用记号笔做标记 Lightcycler 荧光定量PCR系统 原理和特点 可使用外标法定量,可加内对照,可做熔点曲线分析。 单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧光检测,扩赠与检测同时进行,提供实时分析和