卡拉胶分解菌的分离和初步鉴定.doc

卡拉胶分解菌的分离和初步鉴定 摘要：通过研究自然变质的工业β－卡拉胶样品，分离检定出四株有分解卡拉胶能力的菌株。其中一株为细菌，其他三株为霉菌。 卡拉胶是某些红藻类的细胞壁多糖,由半乳糖核半乳糖衍生物构成的半乳聚糖硫酸酯[1] [2],由于糖苷键和硫酸酯键的位置不同分成β－卡拉胶、γ－卡拉胶、κ－卡拉胶等几种。不同的卡拉胶具有不同的凝固性和表面活性，可用于凝固剂黏合剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂等，广泛用于食品工业。卡拉胶还具有独特的生理活性，可刺激结缔组织和骨胶原的生长，在抗病毒、抗凝血和免疫方面也有作用，特别是其降解产物硫脂多糖的药理作用更为优良[4] [5]。 但卡拉胶作为一种海产多糖，很少为陆地微生物所降解[6]。本实验通过研究自然变质的工业β－卡拉胶样品，分析其变质的机理和其中微生物组成，分离筛选出有分解卡拉胶能力的菌株[1]，为防止卡拉胶在储藏中变质和制备卡拉胶药用降解产物提供依据和方法。 材料与方法 1.1 材料与设备 菌源：卡拉胶生产厂家仓库中自然变质的卡拉胶样品 培养基： 分离用： （1）醋酸菌培养基：葡萄糖 500g，酵母膏 10g，碳酸钙 20g，琼脂13g，蒸馏水 1L。pH 6.8。 （2）玉米培养基：玉米粉 65g，蒸馏水 1L。 （3）CaCO3明胶麦芽汁培养基： （4）MRS琼脂培养基 （5）营养琼脂 （6）马铃薯培养基 （7）真菌培养基 筛选用： （1）甲基红卡拉胶培养基：甲基红 0.1g，卡拉胶 40g，营养肉汤 10g，蒸馏水 1L。 （2）纯卡拉胶培养基：卡拉胶 5－20g，蒸馏水 1L。 1.1.3 主要设备：高压灭菌锅，恒温培养箱，恒温摇床，无菌工作台，烘箱，电子分析天平，手提式pH计，旋转式粘度计。 方法 变质卡拉胶微生物的分离培养 采用稀释涂平板法对微生物进行分离，稀释度为10－2、10－3、10－4、10－5，分别涂布营养琼脂培养基平板和麦芽汁培养基平板上，每个浓度3个平板。培养后进行观察，计数，并对其中的菌落进行分离。 1.2.2 分解卡拉胶微生物的筛选 将分离到的可疑菌种接入甲基红卡拉胶培养基中，经过若干天培养后，如该菌株可以分解卡拉胶使硫酸解离则所在的培养基变红。 选取其中红色最明显的扩增（细菌使用营养肉汤，真菌使用液体真菌培养基），将其培养液50ml接入200ml不同浓度的纯卡拉胶培养基中，另接入无菌水作对照组，测量其粘度作为对比。如卡拉胶分解则粘度有明显降低。 菌种的鉴定 将分离到的菌株涂片进行形态鉴定。 将有分解卡拉胶效果的细菌样品送广东微生物所进行快速鉴定。 结果 表1 初步分离的微生物的形态鉴定和筛选结果 实验编号 菌落形态 菌体形态 ＃1 毛霉 ――――― ＃2 青霉 ――――― ＃3 分枝状菌落 革兰氏阴性，杆菌 ＃4 橙色光滑圆形菌落 革兰氏阳性，球菌 ＃5 黄色光滑圆形菌落 革兰氏阳性，球菌 ＃6 黑霉 ――――― ＃7 白色光滑半透明菌落 革兰氏阴性，长杆菌 ＃8 橙色菜花样菌落 革兰氏阳性，卵形细菌 表2 甲基红卡拉胶培养基的筛选结果 实验编号 对卡拉胶的分解 ＃1 ＋ ＃2 ＋＋＋ ＃3 － ＃4 － ＃5 ＋＋＋ ＃6 ＋ ＃7 － ＃8 － ＋表示令甲基红卡拉胶培养基变红，－表示与甲基红卡拉胶培养基无红色反应 表3 纯卡拉胶培养基接入菌液的粘度变化 卡拉胶浓度 摇床培养时间 菌种 培养后的粘度（Pa*S） 1.0％ 9天 无菌水 0.859 0.928 1.019 1.315 1.528 9天 ＃2 0.000 0.003 0.005 0.008 0.008 5天 ＃5 0.005 0.011 0.013 0.005 0.003 2.0％ 9天 无菌水 完全凝固 9天 ＃2 0.056 0.075 0.072 0.061 0.069 5天 ＃5 1.315 1.192 1.189 1.168 1.205 结论与分析 3.1卡拉胶作为一种海产多糖，很少为陆地微生物所降解，多数卡拉胶分解菌多为海产。本实验对自然变质的工业β－卡拉胶进行研究，成功分离出有分解卡拉胶能力的细菌和霉菌各一株。 3.2 经过筛选出的霉菌为青霉，细菌为 3.3 通过这一实验，确认工业卡拉胶的自然变质确实与微生物有关，通过抑制微生物的生长和繁殖，可以达到保存卡拉胶的目的。并且由于所有此类菌株均为好气菌，所以应以厌氧、干燥为储存条件。 3.4 结合本实验的研究情况，可以将分离出的微生物应用于卡拉胶酶，卡拉胶分解物的生产和研究[7]。 参考文献： [1]方尚玲、游剑、何文涛，海藻糖产生菌株的化学