高效阴离子交换色谱法测定食品中的低聚半乳糖284.31KB.docx

高效阴离子交换色谱法测定食品中的低聚半乳糖冯云3颜春荣2徐春祥2?王岁楼1*林慧1,2,3（1．中国药科大学江苏南京210009；2．江苏省食品药品监督检验研究院，江苏南京210008；3．江苏省产品质量监督检验研究江苏南京210007）摘要：本文建立了一种高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器法测定食品中低聚半乳糖的检测方法。样品溶于水后，用磷酸盐缓冲液提取样品中的低聚半乳糖和乳糖，提取液用?-半乳糖苷酶水解。用高效阴离子交换色谱仪分别测定水解前后半乳糖和乳糖含量，通过水解前后半乳糖和乳糖含量的变化计算食品中低聚半乳糖的含量。本方法方法学验证结果表明，回收率为87.0%~110.0%，RSD小于7.59%。本方法是对AOAC2001.02方法的一个改进优化方法，简化实验步骤、提供了详细的样品稀释因子，本方法可以很好的适用于婴幼儿食品、液态奶、果汁、食醋中低聚半乳糖的测定，在食品中低聚半乳糖特殊膳食监管和防止低聚半乳糖的过量滥用方面具有重要意义。关键词：低聚半乳糖；?-半乳糖苷酶；高效阴离子交换色谱低聚半乳糖（galactoosaccharide，GOS）是一种具有天然属性的功能性低聚糖，在自然界中，动物的乳汁中存在微量的GOS，而人母乳中含量较多，婴儿体内的双歧杆菌菌群的建立很大程度上依赖母乳中的GOS成分[1]。GOS是一种重要的益生元，能够选择性地促进人体肠道内固有的双歧杆菌等有益菌的增殖，从而具有抑制肠道内腐败菌的生长、减少有害代谢产物的形成、预防肠癌的发生、防止便秘、降低血清胆固醇含量、促进矿物元素吸收、预防龋齿、增加机体免疫力及改善脂质代谢等多种特定的生理功能[2]。因此GOS作为一种新型功能食品添加剂在食品加工业中的应用非常广泛，根据中华人民共和国卫生部2008年第20号公告，目前GOS 作为新资源食品，可应用于婴幼儿食品、乳制品、饮料、焙烤食品、糖果中，但食用量不大于15克/天[3]。工业化生产的GOS一般是以乳糖为原料，经具有半乳糖基转移活性的β-半乳糖苷酶（EC3）的作用下，首先将乳糖水解成半乳糖和葡萄糖，然后再将半乳糖转移到乳糖的半乳糖基上生成GOS，其分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1~7个半乳糖基，即Gal-(Gal)n-Glc/Gal（n 为0~6）[4]。由于GOS半乳糖苷键间连接方式的不同，GOS 的结构呈现多样化。半乳糖之间以β（1→3）、β（1→4）、β（1→6）等键相联结，其中以β（1→4）键为主；半乳糖与葡萄糖之间的结合键主要为β（1→4）键[5]。目前GOS已经被添加进多种食品中，但是关于食品中GOS的检测方法目前尚未有国家标准出台，已有的文献报道的检测方法，仅仅是针对特定的一种产品进行检测而不是系统的检测各类产品[6]，或是简单综述而未给出具体方法参数[7]。本实验在AOAC2001.02方法[8]基础上进行了优化，简化实验步骤、提供了详细的样品稀释因子，可以很好的适用于婴幼儿食品、液态奶、果汁、食醋中GOS 的测定。基金项目：国家质检总局项目（2013QK191）；江苏省质量技术监督局科技项目（KJ133407）；江苏省大型科学仪器设备共享服务平台项目（BZ201206）。第一作者：林慧（1984），女，在读博士?通讯作者：Tel：（025E-mail：xcx70@163.com（徐春祥）；Tel：（025E-mail：cpuwsl@126.com（王岁楼）.1材料与方法1.1材料与试剂α-淀粉酶（酶活力≥1.5U/mg）；β-半乳糖苷酶（来源于米曲霉，酶活力≥8U/mg）美国Sigma 公司；磷酸二氢钾（分析纯）、磷酸氢二钾三水合物（分析纯）、乙醇（分析纯）、乙腈（色谱纯）国药集团化学试剂有限公司；50%氢氧化钠（色谱纯）美国Fluka公司；无水醋酸钠（色谱纯）美国Sigma公司；水(去离子水)美国Millipore公司；半乳糖标准物质（纯度≥98%）、无水乳糖标准物质（纯度≥98%）德国Dr.Ehrenstorfer公司。1.2仪器与设备高效离子色谱仪配有三元及以上梯度泵，脉冲安培检测器，金工作电极美国戴安公司。XS-205DU型电子分析天平美国梅特勒-托利多公司；FE20酸度计美国梅特勒－托利多公司；XW-80A漩涡混合器上海青浦沪西仪器厂；SHA-B水浴恒温振荡器常州国华电器有限公司；FW100型高速万能粉碎机天津市泰斯特仪器有限公司。AvantiJ-E型离心机美国贝克曼库尔特公司；HVE-50高压蒸汽灭菌锅日本HIRAYAMA公司。1.3方法1.3.1溶液的配制标准储备溶液配制半乳糖储备溶液（1.0mg/mL）：准确称取适量半乳糖标准物质，用水溶解，配制1.0mg/mL的半乳糖储备溶液，保存于4℃冰箱，可使用1个月。乳糖储备溶液