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HPV基因分型定量检测试剂盒在 预防宫颈癌中的应用 Lely 二〇〇九年三月 目 录 一、前 言 发展中国家,癌症是主要的健康杀手 癌症发病率在不断上升 子宫颈癌是发展中国家排列前位的癌症 人乳头瘤病毒（Human Papillomaviruses, HPV） 双链DNA无包膜病毒 环状DNA，约8Kb； 病毒颗粒直径为50～55nm； 依靠宿主细胞进行复制、转录和翻译。 “几乎所有宫颈癌患者的病理样本中均能找到HPV病毒，从而印证了HPV是宫颈癌的主要原因，也使宫颈癌成为目前人类所有癌症病变中唯一个病因明确的癌症。” Jan M. Walboomers教授 以HPV感染为主要病因在各种癌症中所占的比例 宫颈癌常规临床检测方法 ? 临床检查：如肉眼观察、阴道镜等 操作简便，但准确率和特异性有待提高（50-70％） ? 细胞学检测：观察宫颈上皮细胞的变异，常见方法有： 巴氏涂片、LCT、 TCT等（70%以上） 1）长期宫颈糜烂可导致宫颈上皮细胞形态变异，但非HPV引起的细胞形态异常与宫颈癌病变没有直接联系。 2）在感染早期，细胞往往不会出现形态变化，但此时HPV对细胞内遗传物质的损伤可能已经产生。 ? 病毒学检测：HPV DNA检测（PCR方法），常见方法有：基因芯片分型检测、荧光PCR等 特异性强、灵敏度高，操作简便快捷(98%) 三、HPV基因分型定量检测试剂盒 （二）HPV DNA基因分型及定量检测方法的介绍 HPV-DNA的分型及定量检测  （三）HPV基因分型检测试剂盒比现有方法优异 1、 HPV基因分型检测试剂盒是根据每个不同的HPV基因型，从大量的HPV基因中筛选独特序列而设计的特异性引物和探针，这些特异性引物和探针与不同基因组DNA或其他病原性微生物核酸无交叉反应，可一次性精确筛查引起宫颈癌的13种高危型HPV病毒亚型，带真实内标。 2、 一般商业用HPV实时PCR试剂盒，灵敏度为500拷贝；市场上信号扩增试剂盒，灵敏度约为5000拷贝。临床实验已证实本试剂盒的的测试最低检出拷贝数为20-100，对CINII、CINIII及宫颈癌的检出率大于98%。 3、 以β-球蛋白基因作为内对照检测样本进行绝对定量，通过β-球蛋白基因可监测每次取样量是否符合检测要求。 4、从DNA提取倒荧光定量PCR的检测，全过程只需要三小时左右，可随到随检，检测不受标本量的控制。 5、本试剂盒携带了国际标准性内标，可对每一份标本进行独立的实验室质控，保证每一个试验结果的可靠性及独立性。 6、各种筛查实验室的诊断学评价结果 （四）HPV基因分型定量检测试剂盒更适合普及使用 第一．本试剂盒所采用方法的选用原则根据稳定、可靠、快速、安全、灵敏、特异、操作简便的原则出发，以适应不同检测目的，特别是考虑到检测成本低这一要求。不但在中国，而且在大多数其它的第三世界国家都更适合普及推广。这对宫颈癌病人的分流 (triage) 及疗后的跟踪检验，对预防、早期诊断、治疗以至人群筛查，对预防因HPV而引起的病症，将有重要的影响。 第二．测试样本数量灵活，每次处理样本数可从一个至十余个。每位技术员每天可完成二百例，更重要者，已有实时荧光PCR仪的实验室，可立即开展本项目。 谢 谢！ * * HPV与宫颈癌 2 HPV基因分型定量检测试剂盒 3 4 前 言 HPV基因分型定量检测试剂盒的 临床意义 1 Sources: WHO 2005, GLOBOCAN 2002, UICC 2003 Cancer Deaths, 2002 Total = 6.7 m Worldwide Developing 60% 4 m Developed 40% 2.7 m Cancer = 11.5% of death HIV + TB + Malaria = 10.5% HPV Hepatitis B, Hepatitis C H. Pylori infection, salty foods Tobacco Use (20-30 year lag in impact) Risk Factors ? ? ? Link to Infection? 4 million 2 million 234k 487k 221k 485k 591k LDC Annual Mortality 5.8 million To