曲尼斯特对大鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡及p、c-myc表达影响.docx

曲尼斯特对大鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡及 p57、c-myc 表达的影响硕士研究生秦辉导师刘厂辉中 文 摘 要目的 观察曲尼斯特对大鼠血管平滑肌细胞（AVSMC）增殖、凋亡及对 p57、c-myc 表达的影响，初步探讨其可能的作用机制。方法 酶消化法原代提取 SD 大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养，取 5-8 代细胞进行实验。细胞按药物加入浓度不同共分为 5 组，分别为曲尼斯特 0、12.5、25、50、100mg/L 组，MTT 比色法测定药物处理 12、24、48 小时后各组细胞增殖速率，流式细胞学和原位细胞凋亡检测试剂盒法（TUNEL）检测药物处理 12 小时后细胞凋亡情况，RT-PCR 法分别检测药物作用 48 小时后 p57 表达及作用 12 小时后 c-myc 表达情况。结果 MTT 比色法观察发现不同浓度曲尼斯特组细胞生长率较对照组降低，其生长抑制率随曲尼斯特加入浓度和时间增加而增加（P〈0.05），表明曲尼斯特抑制VSMC 增殖在一定范围内存在浓度和时间依赖，经 RT-PCR 扩增后，凝胶成像可见 VSMC 中 P57 表达随药物浓度的增加而增加，提示曲尼斯特可能通过诱导 p57表达抑制细胞增殖；流式细胞学和原位细胞凋亡检测试剂盒法（TUNEL）检测 VSMC细胞凋亡示细胞凋亡率较对照组增加,并且随着曲尼斯特浓度的增加 VSMC 凋亡率越来越高（P〈0.05），表明曲尼斯特诱导 VSMC 凋亡在一定范围内存在浓度依赖，而 RT-PCR 扩增后的凝胶成像可见随着药物浓度增加 VSMC 细胞内 c-myc表达减少，提示曲尼斯特可能通过抑制 c-myc 表达促进 VSMC 凋亡。1结论 1 尼斯特可抑制 SD 大鼠 VSMC 增殖，并且该抑制作用在一定范围内有浓度及时间依赖关系；曲尼斯特可诱导 VSMC 凋亡，并且该诱导作用在一定范围内有浓度依赖关系。2 尼斯特可诱导 SD 大鼠 VSMC p57 mRNA 的表达、抑制c-myc mRNA 的表达，并且曲尼斯特对 p57、c-myc mRNA 表达的影响在一定范围内有浓度依赖关系。3 尼斯特可能通过诱导 P57 mRNA 的表达抑制 VSMC 增殖，通过抑制 c-myc mRNA 的表达来促进 VSMC 凋亡。关键词 曲尼斯特，平滑肌细胞，p57，c-myc，增殖，凋亡，2The Effect of Tranilast on Proliferation And Apoptosis ofVascular Smooth Musle Cell of Rat in Vitro Culture AndOn Secretion of p57 and c-mycABSTRACTObjectiveTo observe the effect of Tranilast on proliferation andapoptosis of thoracic aorta vascular smooth musle cell (VSMC) of rat invitro ，and to study on the potential mechanism.MethodsPrimaryculturesofratVSMCswereobtainedfromenzymatically dissociated SD rat thoracic aorta.The experiments wereperformed using subconfluented cells at passages five through eight.VSMCs were divided into five groups according to different drugconcentration.The five groups were 0,12.5,25,50,100mg/L Tranilast grouprespectively.MTT colorimetry was used for assaying prolixferation ofVSMCs after 12,24,48 hours. Apoptosis of cells treated with differentconcentrations of drugs for 12 hours was observed by flow cytometry andTUNEL Apoptosis Detection Kit.RT-PCR was used for detecting expressionof p57 in VSMCs trerted with different concentrations of drugs for 48 hours.expression of