鳕鱼皮中流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的分析-analysis of neuraminidase inhibitory peptides of influenza virus in cod skin.docx
- 1、本文档共74页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
鳕鱼皮中流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的分析-analysis of neuraminidase inhibitory peptides of influenza virus in cod skin
鳕鱼皮中流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的研究摘要神经氨酸酶(NA)是流感病毒表面重要的糖蛋白,在病毒的复制和传播过程中起重要作用。流感病毒容易产生变异,而NA活性位点高度保守,因此以NA为靶点的抗流感病毒药物成为了当前研究的热点。目前上市的NA抑制剂有扎那米韦和奥司他韦,而化学合成的药物成本高,价格贵,容易产生神经系统的不良反应以及其他的副反应,因此寻找天然抗病毒药物尤为重要。本实验以低值鳕鱼皮胶原蛋白为原料,探讨了其酶解液中活性肽的NA抑制活性,优化了酶解条件,经过分离纯化得到了高活性组分,鉴定了其结构,研究了其性质,并在细胞水平探讨了其抗病毒的作用方式。本文主要研究内容如下:1.采用不同的蛋白酶对鳕鱼皮胶原蛋白进行酶解,得到了具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性的酶解物,在9种蛋白酶中筛选出胃蛋白酶为最佳水解用酶,其水解物的IC50值为8.86mg/mL。单因素实验分别考察了加酶量、底物浓度、酶解时间对酶解反应产物抑制活性的影响。利用响应面法优化了酶解条件,得到了利用鳕鱼皮胶原蛋白制备NA抑制活性肽的最佳条件为:加酶量1600U/g,底物浓度22mg/mL,酶解时间6.8h,优化条件后的酶解液IC50值为7.95mg/mL(P0.05)。用10mg/mL的粗酶解液进行细胞实验,得到的抑制率为66.6%,通过细胞病变抑制实验初步验证了酶解液的抗病毒活性。2.利用超滤、SephadexG-15凝胶柱层析、反相高效液相色谱等技术对NA抑制粗酶液进行了分离纯化,获得了一条具有NA抑制活性的多肽,鉴定其结构,并对其性质进行了研究。得到的氨基酸序列为PGEKGPSGEAGTAGPPGTPGPQGL。采用体外模拟胃肠道消化法,测定了不同阶段消化液对NA抑制活性的影响。研究发现活性肽不能抵制消化酶的作用,经过胃肠蛋白酶水解后,NA抑制活性显著降低,甚至失活,说明该活性肽不适合经口服用,需要考虑其他的途径摄入。抑制动力学实验显示,该活性肽为竞争性抑制剂,抑制常数Ki为0.29mmol/L。3.在细胞水平上对鳕鱼皮胶原蛋白多肽的抗流感病毒活性进行了研究。用MTT法测得NA抑制活性肽的最大无毒浓度为250μg/mL。在被感染的MDCK细胞上,活性肽对流感病毒有一定的抑制活性,一定浓度范围内,抗病毒效果与活性肽浓度成正相关,其半数抑制浓度IC50为471μg/mL。以三个不同作用方式(预处理,吸附同时,吸附后)对病毒进行处理,均有明显的抗病毒效果,说明活性肽不仅能降低病毒的毒力,而且能影响病毒与宿主细胞的吸附及其进入细胞后的复制和传播,说明鳕鱼皮多肽通过多种方式抗病毒。但是不同方式的抗病毒效果不同(P0.05),预处理组(138.7μg/mL)吸附时处理组(319.3μg/mL)吸附后处理组(417μg/mL),说明活性肽可能直接作用于病毒颗粒。在红细胞凝集实验中,随着活性肽的浓度增大,病毒的凝集价显著降低,说明NA抑制活性肽能显著影响HA的活性,也进一步证明了活性肽的抗病毒作用具有多靶点。关键词:鳕鱼皮;抗流感病毒活性肽;神经氨酸酶;分离纯化;细胞病变实验ThestudyofactivepeptidefromcodskinswithinfluenzavirusneuraminidaseinhibitoryactivityAbstractNeuraminidase(NA)isoneoftwoglycoproteinsexpressedonthevirussurface,anditisimportantforreplicationandspreadingoftheinfluenzavirus.Theyareeasytomutate,whiletheactivesiteofNAishighlyconservedacrossallinfluenzaAandBvirusstrains,soNAisanattractivetargetforananti-viralstrategyduetoitskeyrole.Sofar,zanamivirandoseltamivirasinhibitorsofNAhavebeenapprovedforhumanusebyFDA.However,thesedrugscancausenausea,vomitingandothersidereaction,whichhavebeenprovedtobethecase.So,searchingfornewantivivalcompoundsfromnaturalproductsisimportantforthedevelopmentofnewtherapeuticagents.Themaincontentsofthisstudywereasfollows:Thecollagenfromc
您可能关注的文档
- 星间星内无线通信技术分析-analysis of inter-satellite intra-satellite wireless communication technology.docx
- 星肋小环藻-铜绿微囊藻春化作用的内在机理研究分析-study on the mechanism of vernalization of microcystis aeruginosa - microcystis costatum.docx
- 星际空间中某些含硫分子生成机理的理论分析-theoretical analysis of the formation mechanism of some sulfur-containing molecules in interstellar space.docx
- 星球车车轮纵向滑移力学分析-mechanical analysis of wheel longitudinal slip of star vehicle.docx
- 星球车轮地作用测控系统分析与设计-analysis and design of satellite wheel ground action measurement and control system.docx
- 星星草puccinelliatenuifloraptmapkk6基因的克隆及其在逆境胁迫下的表达特性研究-cloning of puccinellia tenuiflora puccinata pkk 6 gene and its expression characteristics under stress.docx
- 星上一体化综合电子系统fdir框架设计及故障检测隔离机制实现-design of fdir framework and implementation of fault detection and isolation mechanism for on-board integrated electronic system.docx
- 星型胶质细胞在不同接触状态下,cyclina cyclind1与p27表达分析-analysis of cyclina cyclin d1 and p27 expression in astrocytes under different contact conditions.docx
- 星语林汀湘十里项目营销策略分析-marketing strategy analysis of xingyu linting xiangshili project.docx
- 星形胶质细胞来源的il-17a对缺血性脑卒中神经再生和功能恢复的影响及机制研究-effects of astrocyte-derived il - 17a on nerve regeneration and functional recovery in ischemic stroke and its mechanism.docx
- 10《那一年,面包飘香》教案.docx
- 13 花钟 教学设计-2023-2024学年三年级下册语文统编版.docx
- 2024-2025学年中职学校心理健康教育与霸凌预防的设计.docx
- 2024-2025学年中职生反思与行动的反霸凌教学设计.docx
- 2023-2024学年人教版小学数学一年级上册5.docx
- 4.1.1 线段、射线、直线 教学设计 2024-2025学年北师大版七年级数学上册.docx
- 川教版(2024)三年级上册 2.2在线导航选路线 教案.docx
- Unit 8 Dolls (教学设计)-2024-2025学年译林版(三起)英语四年级上册.docx
- 高一上学期体育与健康人教版 “贪吃蛇”耐久跑 教案.docx
- 第1课时 亿以内数的认识(教学设计)-2024-2025学年四年级上册数学人教版.docx
文档评论(0)