星星草puccinelliatenuifloraptmapkk6基因的克隆及其在逆境胁迫下的表达特性研究-cloning of puccinellia tenuiflora puccinata pkk 6 gene and its expression characteristics under stress.docx

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2018-06-03 发布于上海
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星星草puccinelliatenuifloraptmapkk6基因的克隆及其在逆境胁迫下的表达特性研究-cloning of puccinellia tenuiflora puccinata pkk 6 gene and its expression characteristics under stress

A Thesis Submitted for the Degree of MasterCLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF PtMAPKK6 GENE IN PUCCINELLIA TENUIFLORA UNDER STRESSCandidate：Qi ZhouSupervisor：Associate Prof. Chang FuSpeciality：Biochemistry and Molecular BiologyDate of Defence：June, 2015Degree-Conferring-Institution：Harbin Normal University目录摘要IABSTRACT II第 1 章绪论 11.1 植物耐盐机制的研究概况 11.1.1 渗透调节剂的合成 21.1.2 离子平衡运输及区域化 21.1.3 活性氧清除系统 31.1.4 激素调节 31.1.5 光合途径改变 31.1.6 转录因子 41.1.7 盐胁迫下的信号转导途径 41.1.8 形态结构的适应 51.2 植物 MAPK 级联途径61.2.1 植物 MAPK 基因及其在逆境胁迫下的作用61.2.2 植物 MAPKK 基因及其在逆境胁迫下的作用91.2.3 植物 MAPKKK 基因及其在逆境胁迫下的作用 111.3 星星草耐盐机制的研究进展 121.3.1 星星草在形态解剖方面研究进展 121.3.2 星星草在生理生态学方面的研究进展 121.3.3 星星草在分子生物学方面的研究进展 131.4 荧光定量 PCR 技术131.5 技术路线 141.6 立题的目的和意义 14第 2 章星星草 PtMAPKK6 基因的克隆152.1 试验材料 162.1.1 星星草的培养与处理 162.1.2 生化试剂 162.1.3 引物 162.1.4 主要仪器设备 172.2 试验方法 172.2.1 星星草根总 RNA 的提取 172.2.2 星星草根总 RNA 完整性、纯度及浓度检测 192.2.3 星星草根部总 RNA 的消化 192.2.4 星星草根部总 RNA 的纯化 192.2.5 纯化后的 RNA 完整性、纯度及浓度检测 192.2.6 星星草总 RNA 的反转录 20PtMAPKK6 开放读码框的克隆 20PCR 产物胶回收 212.2.9 扩增片段的连接 212.2.10 连接产物的转化 222.2.11 阳性重组子筛选 222.3 结果与分析 232.3.1 星星草根总 RNA 的提取 23PtMAPKK6 开放读码框的克隆 23pT-PtMAPKK6 重组质粒的菌落 PCR 筛选 242.3.4 PtMAPKK6 基因序列的生物信息学分析 252.4 讨论 252.5 小结 26第 3 章盐、干旱及低温胁迫下星星草 PtMAPKK6 基因的表达特性分析 273.1 试验材料 273.1.1 星星草的培养与处理 273.1.2 主要仪器设备 273.1.3 酶和生化试剂 - 27 -73.2 试验方法 283.2.1 星星草总 RNA 的提取 283.2.2 星星草总 RNA 完整性、纯度及浓度检测 283.2.3 星星草根部总 RNA 的消化 283.2.4 星星草总 RNA 的纯化 283.2.5 反转录合成 cDNA 第一条链 283.2.6 Real-time PCR 283.3 结果分析与讨论 293.3.1 星星草总 RNA 质量分析 29II3.3.2 星星草根中 PtMAPKK6 基因在不同浓度 NaCl 胁迫下的特异性表达分析 303.3.3 星星草根中 PtMAPKK6 基因在干旱胁迫下的特异性表达分析 ... 313.3.4 星星草根中 PtMAPKK6 基因在低温胁迫下的特异性表达分析- 31 -13.4 讨论 333.4.1 星星草根中 PtMAPKK6 基因在不同浓度 NaCl 胁迫下的特异性表达分析333.4.2 星星草根中 PtMAPKK6 基因在干旱胁迫下的特异性表达分析 ... 333.4.3 星星草根中 PtMAPKK6 基因在低温胁迫下的特异性表达分析 ... 343.5 本章小结 34第 4 章盐胁迫下星星草 PtMAPKK6 基因与其它盐胁迫应答基因表达模式的比较分析354.1 试验材料 354.1.1 星星草的培养与处理 354.1.2 主要仪器设备 354.1.3 酶和生化试剂 354.2 试验方法 354.2.1 星星草总 RNA 的提取354.2.2 星星草总 RNA 完整性、纯度及浓度检测354.2.3 星星草根部总 RNA 的消化与纯化354.2.4 反转录合成