新型聚乙烯亚胺纳米凝胶携带mirna质粒抑制大鼠kupffer细胞核因子κb的表达-novel polyethyleneimine nanogel carrying mirna plasmid inhibits expression of nuclear factor κ b in rat kupffer nucleus.docx

万方数据 万方数据 HYPERLINK \l _bookmark0 致 谢 44 HYPERLINK \l _bookmark1 在读期间发表论文 45 重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 PEI-NP Polyethyleneimine nanogel particles 聚乙烯亚胺纳米凝胶 miRNA Micro ribose nucleic acid 微小核糖核酸 KC Kupffer cells 库普弗细胞 NF-κB Nuclear transcription factor kappa B 核转录因子 kappa B CCK-8 Cell counting kit-8 细胞计数试剂盒 8 qRT-PCR Real time quantitative polymerase chain reaction 实时荧光定量聚合酶 链式反应 WB Western blot 蛋白质印迹法 TEM Transmission electron microscope 透射电子显微镜 IHC Immunohistochemistry 免疫组织化学技术 FCM Flow cytometer 流式细胞术 FITC Fluorescein isothiocyanate isomer I 异硫氰酸荧光素 PI Propidium Iodide 碘化丙锭 EmGFP Enhance monomer green fluorescent protein 增强型单体绿色荧光 蛋白 gDNA Genomic deoxynucleic acid 基因组脱氧核糖核酸 RNA Ribose nucleic acid 核糖核酸 mRNA Messenger ribose nucleic acid 信使核糖核酸 PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 bp Base pair 碱基对 DMEM Dulbeccos modified eagle medium 良伊格尔改良培养基 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 LB Luria-Bertani medium LB 培养基 BSA Albumin from bovine serum 牛血清白蛋白 OD Optical density 光密度 KD Kilodalton 千道尔顿 1 UTR untranslated regions 非翻译区 P/S Penicillin/streptomycin 青霉素/链霉素 TBST Tris buffered saline tween 洗膜缓冲液 SDS Polyacrylamide gelelectrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 NaF Sodium fluoride 氟化钠 BCIP/NBT 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl phosphate/nitro-blue tetrazolium 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐/ 氮蓝四唑 2 新型聚乙烯亚胺纳米凝胶携带 miRNA 质粒抑制大鼠 Kupffer 细胞核因子κB 的表达 摘 要 目的： 研究新型聚乙烯亚胺纳米凝胶（PEI-NP）携带小RNA（miRNA） 质粒沉默大鼠Kupffer细胞（KC）内核因子κB（NF-κB）的表达。 方法： 1. 设定 LPSNs 与 miRNA 梯度质量比（30:1、25:1、20:1、15:1、 10:1、5:1、2:1）37℃普通水平摇床混合 30 min 后，凝胶电泳检测 PEI-NP 装载 miRNA 质 粒的 容量； 再以 PEI-NP/miRNA 质粒 混 合物 转染 RAW264.7 细 胞 后 分 别 采 用 CCK-8 法 检 测 细 胞 毒 性 ， annexin Ⅴ -FITC/PI 孵育后再利用流式细胞仪检测 RAW264.7 细胞凋亡。从而获 得 LPSNs 载荷质粒最适质量比。 2. 根据 LPSNs 最适载荷质粒的质量比，以 PEI-NP/miRNA 质粒混 合物转染 RAW264.7 细胞，分别在转染细胞 12h、24h 和 48h 后采用流 式细胞仪检测转染率，实时定量 PCR（qRT-PCR）检测 RAW264.7 细 胞 NF-κB mRNA 水平，Western blot 法检测 RAW264.7 细胞 NF-κB 蛋 白水平，从而获得 LPSNs 介导 miRNA 质粒转染体外巨噬细胞的效率。 12 只清洁级 SD 大鼠随机分为转染组和空载组，每组 6 只。以 PEI-NP/miRNA 质粒