细菌性疾病的实验 禽类实验室诊断技术 知识课件.ppt

细菌性疾病的实验室诊断 细菌性疾病实验室诊断步骤 常规细菌学诊断 免疫学诊断 基因诊断 常规细菌学诊断 1.病料的采集 2.病料直接涂片染色镜检，观察细菌的形态与结构。 3.分离培养 接种至选择培养基或鉴别培养基，根据菌落的大小、形态、颜色、表面形状、透明度和溶血性，作出初步诊断，同时取单个菌落再次涂片染色镜检。 常规细菌学诊断 4.生化试验 根据细菌分解能力不同，代谢产物也不同，对分离到的细菌进行鉴定。 5.动物接种试验 利用动物试验可鉴别细菌的致病性。 6.药物敏感试验 选择有效药物治疗 二、免疫学诊断 血清型鉴定，可进行血清学试验。利用已知特异性抗体检测有无相应的细菌抗原可以确定菌种或菌型。 三、基因诊断 通过检测细菌的核酸基因序列进行诊断，主要有聚合酶链式反应（PCR）和核酸杂交技术。 （二）采集病料的方法 1. 血液 全血：先于灭菌注射器内吸取抗凝剂3.8%柠檬酸钠1ml，再心脏或翅静脉采血4ml，混匀后注入灭菌容器内。 血清：不加抗凝剂，采全血注入灭菌试管，室温中凝固约1-2小时，上清液即血清部分 2. 组织和实质脏器 无菌剪取2~4cm3的心、肝、脾、肺、肾等有病变的组织，分别置于灭菌容器内。 3.胸腹水、关节液、脓汁和渗出物 用灭菌的注射器烫烙部位插入，吸取液体注入灭菌试管内，塞好棉塞。或用灭菌接种环经消毒部位插入，蘸取病料直接接种于培养基上。 4.肠道：将肠管剪开，除去内容物，用烧红的镊子轻轻烫烙黏膜表面，将灭菌接种环插入黏膜层，取少量材料接种在培养基上。 5.皮肤及羽毛 皮肤：取病变明显区的边缘部分少许放入灭菌容器中。 羽毛：用刀刮取少许病变明显部羽毛及其根部皮屑，放入灭菌容器中。 （三）常见禽细菌性疾病的病料采集 1.鸡白痢：鸡白痢沙门氏菌，取肝、脾、肺、卵巢、输卵管。 2.鸡伤寒：鸡伤寒沙门氏菌，取肝、脾 3.大肠杆菌病：致病性大肠杆菌，肝、脾、卵巢、输卵管、鼻窦、气囊、气管、关节等。 4.坏死性肠炎：魏氏梭菌，肠道。 葡萄球菌病：金黄色葡萄球菌，肝、脾、血液、关节、皮肤、肌肉。 链球菌病：兽疫链球菌、粪链球菌，肝、脾、血液。 禽霍乱：多杀性巴氏杆菌，肝、脾、血液、关节。 曲霉菌病：烟曲霉菌、黄曲霉菌等，肺。 慢性呼吸道病：鸡毒支原体，气管、气囊。 传染性鼻炎：副鸡嗜血杆菌，鼻窦、气囊、气管、眼。 （四）病料的运送 1.试管和广口瓶中的病料应密封后装在冰壶中运送，防止翻倒。 2.整只禽的尸体，应用适宜消毒液浸泡的布包好，装入塑料袋中运送。 3.应附病料记录，如送检单位、禽的品种、性别、日龄、送检病料的种类、检验的目的、死亡日期、送检日期以及临床病例摘要（发病时间、死亡情况、临床表现、接种疫苗情况、用药情况）。 二、细菌的分离培养 分离培养注意事项 细菌的分离培养方法 （一）分离培养注意事项 1.严格的无菌操作 2.适宜的生长条件：根据待检材料中病原菌的特征，选取合适的培养基。 性质不明的细菌初次分离培养时，应尽量多选用几种培养基，如普通培养基、特殊培养基、厌氧培养基等。分别放在普通大气、 含5%~10%CO2的容器、厌氧环境中培养。最后，要考虑培养温度和时间。 （二）细菌的分离培养方法 1.平板划线分离法：通过将被检材料划线稀释而获得独立的单个菌落，以便根据菌落性状进行鉴别和纯培养。 平板划线分离法操作 （1）右手持接种环，使用前在酒精灯火焰灭菌。 （2）待冷却后，挑取欲检病料少许，如为脏器，先将表面烧烙后，用灭菌解剖刀切开，接种环由切口插入钓取组织。 （3）左手掌托平皿，拇指、食指将平皿盖揭开，角度尽量小。 （4）将所取材料接种于平板培养基边缘，随即向下连续平行划线至平板的底部，划线时接种环与平板表面所成的角度要小，以免划破琼脂。划线要密而不重复。 （5）划线完毕，先盖好平板，将接种环上残留的细菌用火焰灭菌。在平皿底部注明病料名称和培养日期。 （6）将平皿倒置于37℃温箱中培养18~24h后观察。少数生长缓慢的细菌则需培养3~7d。