动物细胞工程(09高三).ppt

动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 生产单克隆抗体 问题讨论: 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 3、过程 探究 探究 有关概念 传代培养：贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖称为传代培养。 探究： 5、应用 ①借助动物细胞的大规模培养，生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等） ②生产基因工程中的受体细胞 ③检测有毒物质，判断某种物质的毒性 ④用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 如筛选抗癌药物等。 二、核移植技术和克隆动物 1.概念 是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。 2.类型 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 （难度高） 探究 2、动物细胞融合过程 （2）B淋巴细胞的特点 （3）单克隆抗体的概念 克隆单个B淋巴细胞形成基因型相同的细胞群，由这一细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 （1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 比较：植物体细胞杂交和动物细胞融合 （4）单克隆抗体的制备 英国科学家米尔斯坦和科勒的设想： 如果把一种B淋巴细胞与在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，并产生足够数量的特定抗体。 过程： B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 筛选 细胞培养 克隆化培养 B淋巴细胞—骨髓瘤细胞 大量B淋巴细胞—骨髓瘤细胞 注射到小鼠体内 体外培养 能分泌所需抗体的细胞 单克隆抗体 （筛选） 抗体检测 思考： （2）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？ （3）制备过程为何要经过两次筛选？ * 思考： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养、 植物体细胞杂交 强调： 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植 1、概念： 2、原理：细胞增殖 幼龄动物或动物胚胎? 取动物 组织块 剪碎组织 胰蛋白酶 处理 单个细胞 ??? 细胞悬液 （细胞贴壁） 要求？？ 原代培养？ … 接触抑制？ 细胞培养 胰蛋白酶 处理 胰蛋白酶 处理 … … 传代培养？ 等同于癌细胞的方向发展 50代 10代~ 保持细胞正常的二倍体核型 细胞贴壁过程 细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止。 接触抑制 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 胰蛋白酶水解蛋白质； 细胞间的成份是蛋白质 １、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织 或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 分裂、增殖旺盛 不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高 4、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 2、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 6、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 因此要注意时间的控制 能， 7、植物组织培养过程要将组织分散成单个细胞吗？ 没有 原代培养：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代细胞培养。 细胞贴壁：将细胞悬液放入培养瓶中，置于适宜的环境中培养，悬液中分散的细胞会贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 接触抑制：贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容呢？ (1)无菌、无毒 (2) 营养 (3)适宜的温度和PH值 (4)气体环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、动物血清等。） 保证细胞顺利的生长增殖 36.5+（-）0.5℃, 7.2-7.4 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 4、条件： 维持培养液的PH （合成培养基+天然成分） (对培养液和所有培养用具进行 无菌处理）