灵芝提取物标准水提公示稿.doc

灵芝提取物（水提） LingzhiTiquwu（huiti） GanodermaLucidum Extract（ater extract）Ganodermalucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.的干燥子实体经提取、浓缩、干燥制成的水提取物。 【性状】本品为黄棕色至棕褐色的粉末；具有本品固有的苦味和香气，无异味，有引湿性。外观颜色均匀，无可见异物。 【鉴别】HPLC鉴别 照高效液相色谱法（通则Y04）测定 【含量测定】灵芝多糖项下色谱图中，供试品色谱图中应呈现与甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖对照品色谱峰保留时间相应的色谱峰。 对照品HPLC图谱 【含量测定】 灵芝多糖 照高效液相色谱法（Y04）测定D-来苏糖（异木糖）对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含0.1mg的水溶液。 对照品储备液的制备 各取甘露糖对照品、葡萄糖醛酸对照品、半乳糖对照品、葡萄糖对照品和L-岩藻糖对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含有0.2mg甘露糖、0.2mg葡萄糖醛酸、0.2mg半乳糖、2.0mg葡萄糖和0.10mg L-岩藻糖的混合水溶液。 对照品溶液的制备 精密量取上述对照品储备液0.2mL、内标溶液0.5ml、0.23mol/L氢氧化钠溶液0.2mL，0.1mol/L 1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮（PMP）甲醇溶液0.5ml，混合于50mL旋蒸瓶中，密塞， 70℃加热30分钟，冷却至室温。加0.15mol/L盐酸溶液0.3ml，充分混匀，用0.45μm的微孔膜滤过，取续滤液，即得。 供试品溶液的制备 精确称取本品0.12g，置锥形瓶中，加热水10mL，超声处理使溶解，放冷，再加乙醇150mL，充分混合，4℃下静置12小时，4000转/分钟离心10分钟，上清液弃去，沉淀加乙醇10mL洗涤，离心，上清液弃去。用热水将沉淀溶解并转移到50mL量瓶中，冷却到室温，再用水定容至刻度，摇匀，滤过。精确量取1mL至反应瓶（安瓿瓶）中，加4mol/L三氟乙酸溶液1mL，将反应瓶密封，在110℃下加热4小时。冷却至室温后，加甲醇3mL，转移到50mL旋蒸瓶中，再用适量甲醇清洗反应瓶2次，洗液并入旋蒸瓶，60℃减压蒸发至干，再向残渣中加甲醇3ml，蒸干，重复三次。往残渣中加水0.2mL、内标溶液0.5mL、0.23mol/L氢氧化钠溶液0.2mL，0.1mol/L 1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮（PMP）甲醇溶液0.5mL，密塞，70℃加热30分钟，冷却至室温。加0.15mol/L盐酸溶液0.3mL，充分混匀，用0.45μm的微孔膜滤过，取续滤液，即得。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm(250mm，5μm）；以乙腈为流动相A，0.05mol/L磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钠溶液123mL和0.05mol/L磷酸氢二钠溶液877ml的混合水溶液）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长250nm；柱温为35℃；流速1.0mL/min。理论塔板数按峰计算应不低于10000。min） 流动相A（%，v/v） B（%，v/v） 0 – 30 16 → 17.5 84 → 82.5 30 – 55 17.5 → 19 82.5 → 81 55 – 60 19 → 19 81 → 81 60 – 61 19 → 16 81 → 84 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，以内标法计算。 根据所得对照品和供试品的峰面积，分别计算出被测定供试品溶液中各单糖的含量。供试品中各单糖含量以质量分数E计，数值以%表示，按公式（E.1）计算。 …………………………（E.1） 式中：E1——相关单糖的含量（％）； Ru——样品中相关被分析物峰面积与内标峰面积的比值； Rs——标准溶液中相关被分析物峰面积与内标峰面积的比值； As——每份标准溶液衍生后的相关分析产物的数量（mg）； F——用于测定样品（1.0mL）相对于样品溶液总体积（50mL）的衍生稀释 因子，50； W——用于制备样品溶液的灵芝提取物重量（mg）。 本品按干燥品计算，含灵芝多糖的含量以甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、L-岩藻糖的总量计，不得少于5.0%。 三萜及甾醇 照紫外-可见分光光度法（Y01）测定 对照品溶液的制备 取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。 供试品溶液制备 取本品粉末约0.4g，精密称定，置100mL量瓶中，加热水5ml超声溶解，冷却至室温，再加无水乙醇50ml，超声处理（功率140W，频率42kHz）45分钟，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液备用。 标准曲