胶成像仪操作规程-厦门大学医学院.DOC

凝 胶 成 像 仪 操作规程 BIO-RAD Gel Dox TM XR+ 厦门大学医学院中心实验室 王晓珍 2017年3月 正式操作仪器之前请注意如下事项： 首先要在仪器预约保护时间内及时使用本人注册的校园卡刷卡开始实验。 1、查看仪器使用记录本，如之前使用者有记录仪器异常情况，请不要开机使用。 2、查看仪器整体有无异常，周围环境是否正常，需要时要开启室内空调，并清空除湿机内水箱。 3、查看仪器使用记录本及刷卡机“日历”，如之前使用者刚刚关机，请等候10分钟以上再开机使用。 开机 按仪器后边主电源按钮，启动仪器，然后打开电脑。 双击电脑桌面上的 图标打开仪器控制软件，进入软件操作界面 1、点击实验协议 建立新的实验程序（或点击 打开已有程序）。 2、进入实验协议设置界面 在获取设置处勾选“1.凝胶成像”。 a、选择实验程序（Choose an application）：在应用程序处点击 选择相应的实验程序 实验程序设定之后，会出现如下对话框，按提示将样品放在紫外透射仪或白光投射仪上，检查滤光片是否在正确位置。 b、选择成像区域（Choose the Imaging Area）：在成像区域对话框中点击“选择凝胶类型”，在下拉式对话框中选择合适的样品大小。或者选择“输入图像区域”人为设定成像范围大小。 c、选择成像曝光时间（Choose Image Exposure Time）：点击“软件将自动优化曝光时间”，并选择强条带或模糊条带，由仪器自动曝光。或人为评估曝光时间，选择“手动设定曝光时间（Manually set exposure time）”并在读秒框中输入曝光时间。 d、在显示选项中勾选“高亮显示饱和像素”，“图像颜色”中选择显示颜色，当图像中有亮度饱和区域时，会以所选颜色显示出来。 图像自动分析设定： a、在分析图像处勾选“2.泳道和条带检测”，设定条带检测灵敏度的参数（低、高或自行设定灵敏度）。 b、分析图像处勾选“3.分析分子量” 设定分子量标准类型，所有Bio-Rad的各类标准品（包括核酸、蛋白）均已预存。也可以自定义分子量标准品，并同时设定分子量标准品的泳道及回归方式。 报告输出设定： 在生成输出处勾选“4.指定输出”，选择设定输出内容 3、程序设置完成后，把胶置于透射仪的中心位置。在程序窗口中点击 按钮，出现运行界面 观察显示器中样品的实时图像，打开凝胶系统的门并移动样品直到其位于成像视野的中心区域，通过滑动照相机缩放滑块调节成像区域的大小。（仪器会自动对焦） 4、点击 按钮获得图片。 未进行自动分析所得图片如下： 获得的图片通过点击显示工具列表按钮改变图片显示方式 点击 保存图片，保存的图片格式为（*.scn） 自动分析后结果及报告 a、数据显示信息 b、分析表格 c、泳道信息 d、标准曲线 图片分析 1、双击打开仪器控制软件后，点击“图像文件” ，打开所要分析的图片文件。 2、自动分析（Auto Analysis） 点选 进入自动分析窗口 在“检测设置”中设定条带检测灵敏度（低、高或自行设定灵敏度），接着在“分子量分析设置”中设定分子量标准、标准泳道及回归方法等参数。 3、图像工具（Image Tools） 在左侧“分析工具箱”中点击图像工具按钮，可以对图片进行翻转、旋转或合并。 4、泳道和条带工具（Lane and Band Tools） 点击泳道和条带按钮，选择“泳道”，点击“自动”，仪器将自动检测图像泳道 ，得到如下图像： 点击“所有泳道”工作栏内各按钮可以整体调整泳道，或者点击“单个泳道”工作栏内各按钮单独调整所选择的泳道。 选择“条带”，点击“检测条带”，然后设置条带检测灵敏度，软件将自动检测各个泳道中的条带 5、分子量分析工具（Molecular Weight Analysis Tools） 此工具可由已知的标准品测算相对的分子量或碱基对。 点击“分析工具”，通过点击“更改”按钮，调出“管理标准”对话框，从中选择相应的分析标准。 通过点击勾选泳道下方的方框，设定标准泳道，同时在回归方法下拉式对话框中选择回归方法。 通过点击 查看各泳道内各条带的分析结果。 6、定量工具（Quantity Tools） ： 选择相对定量，点击“选择”按钮，然后在所选条带位置点击一下，会出现绿色R标记，表明以此条带为标准做相对定量。分析结果显示在分析表中 。 选择绝对定量，点击“选择”按钮，然后 选择已知标准品浓度的条带（至少两个以上, 以A表示），并设定合适的回归