产脂肪酶酵母的筛选及菌种鉴定.pdf

安徽农业科学，JournalofAnhuing6．Sci．2010，38(20)：10512—10513，10525 责任编辑 刘月娟 责任校对 傅真治 产脂肪酶酵母的筛选及菌种鉴定 尚喜雨 ，柯涛 ，王玲玲 ，高媛 ，杨果 ，乔江涛 (1．南阳医学高等专科学校，河南南阳473058；2．南阳师范学院，河南南阳473000) 摘要 [目的]从土样中筛选出有脂肪酶活性的酵母茵，测定酶活并，扩增酶活较高的l株酵母茵18SrDNA，测序后 比对，确定所得菌株 的种属。[方法]以罗丹明B为指示剂，采用常见的培养基培养，采用滴定法测定菌株的酶活，扩增 18SrDNA，测序后 BLAST比对。[结 果]筛选出3株有脂肪酶活性的酵母菌，酶活为1．7～4．0U／ufl。测序结果表明，所得菌株分别与Canclid~，Rhodotorula，Trichosporon等属 亲缘关系接近。[结论]产脂肪酶酵母茵的筛选和鉴定可为研究酵母茵全细胞催化生成生物柴油打下前期基础。 关键词 脂肪酶；菌株筛选；酵母 ；18SrDNA；酶活力 中图分类号 Q814 文献标识码 A 文章编号 O517—66l1(2olo)2o一1o512—02 IsolationandIdentification ofLipase·producingYeast SHANGXi．yuetal (MedicalCollegeofNanang。Nanyang，Henan473058) Abstract fObjective] elipase—producingyeastwasscreenedfromthesoilsample．Theactivityoflipasewasdetectedandtl1elipasewasam— Dlmedwithhigheractivityby18SrDNAafterratioonsequencing．Thestrainswereidentified．1Method]Commonculturemethodwasused， plateisolationusingRhodamineBasindicatoranddetectionusingtitrationandamplificationby18SrDNAafterratioonsequencing．[Result] Th reelipase—producingyeastwerescreened．Theactivityreached1．7—4．0U／m1．AndtheywereidentifiedasCandida．RhodotorulaandTrichos— poron． C『onclusion]Theisolationandidentificationoflipase-producingyeastofferedthefoundationofbio·dieselproduction． Keywords Lipase：Strainisolation；Yeast：18SrDNA；Lipaseactivity 脂肪酶(Lipase，EC3．1．1．3)，又称三酰基甘油酰基水解 得到的菌株在YPD培养基上进行纯化培养24～48h。观察 酶 ，可分解各种天然的油和脂肪，将甘油三酯最终水解为脂 菌落特征，根据手册 进‘行显微镜检查。挑选出酵母菌的平 肪酸和甘油…，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化、生物 板，镜检之后重复进行3次纯化分离。 能源等方面。脂肪酶在微生物界分布很广。不同土壤中微 1．2．1．5 摇瓶培养。挑取纯化后长势较好的单菌落 1～2 生物所产脂肪酶性能不尽相 同。尽管产脂肪酶微生物易被 环，接种于50mlYPD液体培养基中，30℃，200r／min培养。 发现，但寻找适于工业规模生产的脂肪酶产生菌及其发酵条 1．2．2 脂肪酶活力的测定。采用指示剂滴定法。将橄榄油 件非常困难。以全细胞催化剂的形式来利用脂肪酶 ，可 乳化液作为反应的底物。取2个 100ml三角瓶，分别于空白 降低成本。笔者从油污土壤中筛选有脂肪酶活性的酵母菌， 瓶(A)和样品瓶(B)中加底物溶液400ml和磷酸缓冲液500 为研究酵母菌全细胞催化生成生物柴油打下基础。 ml。向A瓶中加入浓度95％