maipa血小板抗原单克隆抗体固定法-广州血液中心.ppt

同种免疫性血小板减少症诊断新方法 Dr. Sentot Santoso PhD 血小板输注讨论会 中国 ·广州 2009.4.27-4.30 同种免疫性血小板减少综合症 胎儿/新生儿同种免疫性血小板减少 (FNAIT) 血小板输注无效 输注后紫癜 被动性血小板减少症 移植相关性血小板减少 同种免疫性血小板减少症的诊断学 抗原测定 表型（PIFT, MAIPA） 基因分型（PCR-RFLP, PCR-SSP, TaqMan） 特异血清，血小板及罕见的HPA基因型 抗体测定 结合测定（PIFT, ELISA, Flowcytometry） 糖蛋白特异免疫测定法(MAIPA血小板抗原单克隆抗体固定法) 新一代血小板抗体试验？ 问题 我们如何改进同种免疫性血小板减少症的诊断呢？ 以稳定的细胞系为来源的DNA产品和血小板同种抗原 基因分型，来自于人类血小板同种抗原的表型的献血者的Ｂ淋巴细胞系 抗体鉴定，转染的CHO细胞稳定表达的人类血小板同种抗原 以Ｂ淋巴细胞系作为来源获得标准DNA 人类血小板同种抗原基因分型的Ｂ淋巴细胞系ISTH/ISBT血小板基因型鉴定实验室 特异等位片段细胞系表达人类血小板同种抗原 被转染的CHO细胞表达ＨＰＡｓ 问题 血小板抗体测定是否可以进一步改善？ 血小板抗体测定的进展 血小板抗原单克隆抗体固定法（ＭＡＩＰＡ） ＭＡＩＰＡ测定的步骤 抗原捕获测定的优点和缺点 新的血小板抗体测定？（１） 　　　w/o the　use　of mab 　　w/o the　use　of whole　platelets 　　　w/o any　washing　step 　　　 　　快速、敏感、特异、可靠 新的血小板抗体测定？（２） 某些血小板同种异体抗体，用现有的技术是检测不到的 漏检anti-HPA-1a 的胎儿与母亲不相容的疑似ＦＮＡＩＴ 抗体检测的影响因素 血小板抗原 　三维结构　密度　表位 血小板抗体 　浓度　亲和力　异质性　 其他因素（比如说：配体） 血小板糖蛋白IIb/IIIa的构象 两种类型HPA-1a 的同种异体抗体 抗原密度 异种表位：单克隆抗体 抗体表达的稳定性 新的血小板抗体测定方法 重组血小板抗原在ELISA体系中的应用 在昆虫细胞中可溶的重组人类血小板抗原产品 可溶性重组HPA-1a and -1b 用rGPIIIa抗体检测anti-HPA-1a（ ELISA） 凝胶抗原特异测定(GASA) 血小板抗体测定：MAIPA vs. GASA 抗原-抗体的“锁与钥匙”的概念 新的血小板抗体测定方法 纯化血小板抗原或者重组血小板抗原 在SPR（表面激元共振，Surface Plasmon Resonance,SPR)中的应用 借助SPR技术的抗原-抗体相互作用的实时分析 表面等离激元（SPR）实时蛋白质-蛋白质交互作用 在SPR中用Mabs 的HPA-1a and HPA-1b 抗原的反应 SPR技术的原则 MabSZ21: HPA-1a “Specific” 单克隆抗体SZ-21 和抗PlA1 抗体的竞争性结合及这种结合潜在的临床应用 Xi X，Zhao Y，Jiang H，Wu Q，LI P， RUAN C 中国 ·江苏血液研究所 、苏州医科大学 Nouv Rev Fr Hematol.1992;34(3):239-42 Mab SZ21 (HPA-1a类似体) 与固定的HPA-1a and HPA-1b 抗原在SPR中的反应 严重的NAIT 病例中低亲和力的HPA-1a 同种异体抗体（1） 严重的NAIT 病例中低亲和力的HPA-1a 同种异体抗体（2） 严重的NAIT 病例中低亲和力的HPA-1a 同种异体抗体（3） 人类血小板抗体的分析 动物模型？ 抗体介导的血小板清除和相关 抑制因子的测定 以NOD/SCID 鼠作为模型进行人类血小板抗体的研究 在NOD/SCID 鼠体内循环期间人类血小板存活的动力学 FNAIT的病理机制 Mab SZ21 抑制体内的HPA-1a 同种异体抗体介导的血小板清除？ Mab SZ21 抑制体外的HPA-1a 同种异体抗体与人类血小板的结合 Mab SZ21 抑制体内的HPA-1a 同种异体抗体介导的血小板清除 结论 基于在分子生物学基础上的HPA的第四代基因分型技术的发展，此技术可以进行快速的ＨＰＡ基因分型。参照DNA来源于永生化细胞系，可以用于基因分型的质量控制 但是，抗体的检查依然个难题。新一