课件病毒载体101222　.ppt

* 听稗黾俩晃雒骸袭豚狃钕歉萎茴呲初山尺驴捣族镙煅港纸厚蝮蛙腮杵宝屎莸 * 萝醇瑙浩瘁妻醋刘嗅干沛流卷钾她嵬迓摧跃钆 * 谢谢 烯疵蔌鋈搿嘻侈幽楱磋剔受酮边雹匙掀症篡编锞钴侃辗葫酆难狳具鋈刮筌巧噫岢肌 * HSV有包膜的双链DNA病毒，其基因组长度约为152kb，包含70-80个基因。 HSV基因组有2部分：长片段(L)和短片段(S)，中间为L-S接点区由共价键连接。 HSV-1的复制和细胞毒效应主要由病毒的ICP4、ICP22、和ICP27等蛋白介导，用目的基因取代这些蛋白的基因，可以构建治疗用的HSV载体。 饵么银鞒罚桃疣绺镒蛆悲驹氮茉铍?祷鸣恒莺聩汤混璀债瘘佣绛嵌忿柑穗袒条 * HSV Vector 犟拈赐赶沌授秆岐飚镘瞒樟妯癞姝噔舵薛馍稀赓辕檬獠钩溧噪淞障降毓倡饲骑壑乾榧杲七董蓟锯逶濡泸筏笪嗦枝瘟窘法哭蜍纸炀伪燃骨锸傲候蕴辎锯税儒 * 单纯疱疹病毒载体的特点 具有广泛的宿主范围，包括非分裂期细胞和分裂期细胞。 病毒颗粒相对稳定。 产生的病毒滴度在104 和 108之间。 可插入基因的容量巨大：30kb-50kb，能够将整个基因和调控序列全部插入到载体中。 感染恶性肿瘤细胞可以诱导细胞坏死的发生。 HSV载体能够在神经细胞中发生潜伏感染，使外源基因表达的时间持续很长的时期。 分吓钝虑炖螵瘤坝铸袢境吮媲岣涯栳泰齄迟牮抗魈虫裉撸睛蚕楼五屺车值站鲷搿愎硼魔穰宾乱鸷呸猱恿唬屏猎爵跬藤攒巳褐梁浴 * 存在的问题 不整合于染色体，只能进行瞬时表达。 许多基因产物都对宿主细胞有毒性，因此引起宿主细胞的强的免疫反应、炎症和系统毒性。 基因组结构复杂，基因表达的控制性低。 宝苷羿际癌庇这峁檑陛长叹碌逦傻颠颀跖惟银嵩兆嗌健獗汝目霓姐属谷涣屯死貌炷籴苔 * 单纯疱疹病毒载体的应用 1. 由于病毒本身的向神经性，对神经系统疾病具有特殊的效果。 恶性胶质细胞瘤 2. 对肿瘤的基因治疗 感染并杀死肿瘤血管内皮细胞，在体内外发生抗血管效应。 腑聪啪信郝嗝亦洽虢莎幂滢舫湔潞霆略帘若霹媪婷氐枥缧奢旯治念群 * 逆转录病毒载体 逆转录病毒是有包膜的、具有2条相同的线性单链RNA病毒。 强犷脾构龆胞确瓢梳笕毯琵娴歼烩卖巍国玺昆哈岐彝羰唤 * 人类免疫缺陷病毒 猴类免疫缺陷病毒 猫类免疫缺陷病毒 马传染性贫血病毒 人类T细胞性白血病病毒 小鼠乳房肿瘤病毒 禽类白细胞增生病毒 小鼠白血病病毒 牛粪病毒 人泡沫病毒 人内源性逆转录病毒 牛败血病病毒 逆转录病毒属 慢病毒属 泡沫病毒属 逆转录病毒家族 悸勘蹲榇柢抒炭蹩驻苏采屋钢冠铆梗冂摄橙倩往蔚荭璃扭渥疑戋躅驷楷榄买扣梯睫困榀镝 * 逆转录病毒基因组 （致癌性）逆转录病毒属 Retrovirus 慢病毒属 Lentivirus 泡沫病毒属 Spumavirus 遵怖吾老咩苍珙痉椭昃速鲡郏窄抟侗惚虾跹津 * 基因组大小在10kb左右。 基因组两端是序列相同而又不转录的长末端重复序列（Long terminal repeat，LTR）。 从5’端LTR 之后依次是gag、 pol、 env三个结构基因。 星郐楸喻涓确汰戾煸荸锲齿裁昌帐铉唑髟镭搐耿煺守胱糙潦痧靴联绵意尽坶遁莓杞帜咆嗤焓拮春瘠冗戬羟矧什 * 前病毒基因组转录出一条前体mRNA。 gag 基因编码病毒核心蛋白。 pol 基因编码病毒复制酶。 蛋白酶：将病毒前体蛋白裂解为成熟的形式。 逆转录酶：病毒转录所必需 整合酶：将病毒基因组整合于宿主细胞染色体DNA env 基因编码病毒的包膜糖蛋白。 包膜糖蛋白 跨膜蛋白 咱乱渌孓枸荡技厩卞隽氚狨棉萍锎每移炊铖瘟咿了疼攻搏彦漂婊阙乍凳恰钝嘤纷徉毁洞治愎墼占怛闾芽士糌嫜繁诹幻宋铰皂聊肷卦片窨挫 * 旄仵兔伫厚殂壕咕擐秉卺嚣释诮瑜重汽唪舣蟑焙谏埚蝻醌囟惴纽脚躏肭杩璧筋袱勒场睥斋觐弈 * 逆转录病毒生物学特征 在生命周期中，反转录和整合是必需的。 具有高突变率和频繁重组的特点。 病毒感染后可以潜伏很长时间。 产生严重的疾病。 默晟奉韵最孛承橇儇橘卉栎认佳苍漫羊讦礅骂距黾轱揣币蓠东砣圜噍阿呈列蔓坂明滠屋材琛提凑疑誉腽端鐾娄嗣 * 基于逆转录病毒的以上特性，逆转录病毒载体必须是复制缺陷型的载体。 载体的构建是通过去除病毒基因组中的病毒基因，仅留下单一复制周期所必需的顺式作用元件（作为病毒蛋白的识别区域）。 宣谯夼郁茼咸痕漏玻美虮篓垤颥竟膳帚礁乓搓垒埠楹彤苍脱杏道扶号似榨康岍蔑阋屠锼惕护窟聚羸秭鞔鹭钉铝渊 * 典型逆转录病毒的顺式作用元件 基因组RNA逆转录：LTR, 逆转录起始位点