[医药卫生]第13章 医学基础化学可见-紫外分光光度法.ppt

为消除溶剂或其他有色物质对入射光的吸收，消除光在溶液中的散射和比色杯对光的反射等与被测物吸收无关的因素的影响，必须采用空白溶液作对照。 测定时，首先将空白溶液置于光路，调节仪器的“Zero”键，使A=0或T=100%，然后开始测定标准溶液或被测液的A。 1. 溶剂空白——除被测物以外，其他溶剂均为无色时，可用溶剂作空白溶液 2. 试剂空白——显色剂有色时，按显色条件加入各种试剂和溶剂，只是不含有被测物的标准品 空白溶液 2. 标准对照法（直接比较法）——根据 Lambert- Beer Law，以该物质吸收光谱图中的?max为入射光。 首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液CS，测其AS, 有：AS=k S C S l 再将样品溶液推入光路，测其AX，则试样溶液的浓度CX为：Ax=k x C x l 由于使用同一入射波长的光，测定同样的物质，采用相同的比色皿，则： AX AS CX = CS 此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法 * * 第13章 可见-紫外分光光度法 Vis-UV Spectrophotometry 仪器分析：主要利用物理学原理进行分析的方法则 称为仪器分析法。 如：光谱分析法 ，色谱分析法 ，质谱分析（MS）法, 电化学分析法 ，核磁共振（NMR）分析法等。 光谱分析法：现已常用的有可见、紫外分光光度法（UV）、 红外分光光度法（IR）、荧光光度法、原子吸 收法和X射线原子荧光法等。 UV主要用于药物制剂的含量测定。激光诱导荧光光谱 的灵敏度已达10-22克，达到了检测单个分子的水平，可用 于癌症的早期诊断。 分光光度法是根据物质的吸收光谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析方法。 根据测定时所选用的光源 紫外分光光度法 可见分光光度法 红外分光光度法 可见-紫外分光光度法(Vis-UV Spectrophotometry): 它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。 5、应用广泛—医药、卫生、环保、化工 紫外-可见分光光度法的特点： 1、与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和 操作都比较简单，费用少，分析速度快; 2、灵敏度高,—10-5 mol/L ~10 -6 mol/L 3、选择性好; 4、精密度和准确度较高;相对误差小 2% ~ 5% 第一节 分光光度法基本原理 第三节 可见分光光度法 第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法 本章内容： 本章教学要求 1.了解分光光度法基本原理、溶液的颜色与光的选择吸收。 2.掌握分光光度法基本原理、透光率和吸光度、 Lambert- Beer 定律、吸光系数和摩尔吸光系数。 3.掌握分光光度计的五大部件和测定方法。 4.了解显色反应及影响因素分光光度法的误差 和测定的条件选择 光的频率 = 光速 光的波长 υ = c ? 光是以电磁波形式传播的光子流。 电磁波能量大小与波长和频率有关。辐射是量子化的，即不连续地、一份一份地发射或吸收，每一份称一个光子。光子的能量与辐射频率成正比、与波长成反比： E = hυ = hc ? 一、 物质对光的选择性吸收 第一节 分光光度法基本原理 单色光——单一波长的光束 复色光——含有多种波长的光束 电磁波谱——以波长大小顺序排列的电磁波谱图 波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500mm 1cm 1m 光谱 ?射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无限电波 方法 光谱法 分光光度法 光谱法 核磁共振 可见光的电磁波谱图 当一束光照射到某物质或某溶液时，该物质的分子、原子或离子与光子作用，光子的能量发生转移，物质中的这些粒子就会发生能级跃迁，从较低能量状态（基态）跃迁到较高能量状态（激发态）： 能 量 E 基态E0 第一激发态E1 第二激发态E2 第三激发态E3 吸收光谱 发射光谱 ? E = hυ