[医药卫生]固相萃取法及进展.ppt

固相萃取法及进展 学生：何苗 主要内容： 一、固相萃取概述 二、固相萃取原理 三、固相萃取的简要过程 四、固相萃取装置 五、固相萃取分类 六、SPE的选择 七、SPE的应用 八、固相萃取应用新进展 九、SPE的展望 一、固相萃取概述 在过去的二十多年中，固相萃取(SPE)出 现并逐渐发展成为一项有效的分离纯化手段，并在药物纯化、精细化学品制备、食品分析、环境分析、生命科学等多个领域发挥着不可或缺的作用。 固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）也称固相提取、液-固萃取。是一项结合了选择性保留、选择性洗脱等过程的分离技术。主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。 二、固相萃取原理 当复杂的样品溶液通过吸附剂时，吸附剂会通过极性相互作用、疏水相互作用或离子交换等作用力选择性地保留目标化合物和少量与目标化合物性质相近的干扰物，其他组分则透过吸附剂流出小柱，然后用另一种洗脱能力较强的溶剂体系选择性地把目标物洗脱下来，从而实现对复杂样品的分离、纯化和富集。 三、固相萃取的简要过程 固相萃取的净化机制可分为保留目标化合物型和保留干扰物型两种。 一、保留目标化合物的固相萃取模式： 1 活化/ 平衡 2 上样 3 淋洗 4 洗脱 二、保留干扰物的固相萃取模式 1 活化/ 平衡 2 上样 3 淋洗 应用实例： 血样处理 先以甲醇 2 mL润湿活化固相萃取柱 ,再先后以水1mL和 0.1%磷酸 1 mL冲洗平衡。取血浆样品0.5 mL,加入0.1%磷酸 0.5 mL;混匀后 ,加入已活化的固相萃取柱上样。样品通过萃取柱后 ,以 0 . 1%磷酸 2 mL淋洗 ,弃去洗脱液 ,用甲醇 0 . 5 mL洗脱 ,收集洗脱液 ,在 50 ℃ 下氮气吹干 ,加入流动相 0 . 25 mL溶解 ,用 0 . 45μm过滤器过滤 ,进样 40μL检测。 四、固相萃取装置 市场上可以买到各种类型 SPE产品。最普通使用的形式是 SPE柱 ，此外还有SPE盘和固相微量萃取的形式。 注射器式SPE柱 常见的注射器式萃取柱由三部分组成： A 柱管； B 筛板（烧结垫）； C 固相吸附剂。 2、SPE盘 3、96孔板SPE装置 还有一种常见的形式是96孔板，即将小体积固相萃取柱与具有96孔的萃取架相连，再通过自动化系统进行控制。 4、SPME 固相微萃取器 五、固相萃取分类 一、SPE根据其相似相溶机理可分为三种： 二、填料（吸附剂）的种类 吸附剂主要有硅胶键合、高分子有机聚合物以及其他吸附剂三大类。 1 硅胶键合吸附剂 以球形硅胶作为基体，在特定条件下让硅胶表面的硅羟基与硅烷化试剂反应，使硅胶表面被指定的化学官能团覆盖，从而得到了硅胶键合吸附剂，键合官能团的类型决定着硅胶键合吸附剂的吸附特性。 2 高分子聚合物吸附剂 为了扩大固相萃取技术的应用领域并改善萃取效果，含亲水基团的聚苯乙烯/ 二乙烯基苯共聚吸附剂被开发出来。该吸附剂兼具亲水基团（吡咯烷酮基团）和疏水基团（二乙烯基苯），属于反相吸附剂，对极性化合物和非极性化合物均有较好的保留，具有亲水亲脂平衡的特性。 与传统硅胶键合反相吸附剂（比如C18）相比，高分子聚合物吸附剂具备以下特性： （1）真正的通用性 （2）更高的稳定性 （3）更宽的pH 值适用范围 （4）更高的吸附容量 （5）不存在次级相互作用 3 其他吸附剂 硅酸镁、石墨化炭黑、氧化铝颗粒等。 在固相萃取过程中，“保留”（Retention）和“洗脱”（Elution）均受目标化合物、吸附剂和溶剂环境三种因素的影响，对于给定的目标化合物，选择合适的吸附剂、样品溶剂以及洗脱溶剂是实现成功分离的关键。 一、影响 SPE固定相和洗脱剂的选择因素： （1） 试样基质和分析物的性质， 如： 结构、 极性、 溶解度和酸碱性质等； （2） 试样中分析物的浓度或浓度范围； （3） 试样溶剂的性质， 试样中存在哪些 对所选分析方法有干扰的物质； （4） 用什么方法进行试样分析， 该方法对试样有什么要求； （5） 试样预处理所要达到的目的。 二、SPE吸附剂的选择举例 三、SPE洗脱液的选择 如果洗脱液选得合适，样品的净化程度和分析物的回收率都会有较大提高。 1、对反相吸附剂如键合硅胶 C18一般使用甲醇或乙腈作为洗脱剂。 2、离子交换吸附剂最常采用的洗脱剂是高离子强度（0.5 m）的缓冲液。 有时候在上样淋洗或洗脱时一种洗脱液极性太强 而另