UPLC_ 基础知识.ppt

Waters 中国有限公司培训中心 液相色谱技术的发展 从HPLC到UPLC － 2004色谱科学的进步 2004.3.8.Waters公司推出全球第一台商品化超高效液相色谱系统－ACQUITY UPLCTM系统，将以往人们可望而不可及的UPLC变成实验室中的现实工具，开创了分离科学的新纪元… 2004年ACQUITY UPLCTM系统获得匹兹堡最佳新产品金奖 2005年ACQUITY UPLCTM系统再获RD100 大奖 Ultra Performance LC? UPLC?的三大优势 UPLC?所展示的优势： 样品通量增加九倍 灵敏度增加三倍 分离度增加两倍 数据质量提高 生产力提高 超高效液相色谱的定义 超高效液相色谱（Ultra Performance LC?） 是分离分析科学中的一个全新类别 涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术 与HPLC的理论及原理相同 在全面提升HPLC的速度、灵敏度及分离度诸品质的同时，保留其原有的实用性及原理 给实验室带来了新奇而强大的能力 ACQUITY UPLC?系统技术创新诸要素 小颗粒杂化填料（1.7μm） 更高耐压(达15000Psi)、低系统体积的输液单元 降低自动进样器的进样周期时间、减少交叉污染 高速检测器，光学及质谱 新的色谱单元之间的通讯协议 功能齐全的诊断能力 为系统完整性而设计的软件 对今天HPLC状况的科学描述 今天的高效液相色谱分离质量被色谱柱的填料品质所推动，同时也被其所限制 优秀的色谱填料会给色谱过程带来速度、灵敏度及分离度提高 填料颗粒度对色谱柱性能的贡献最大 我们遇到的挑战是：今天的仪器是否能够把更小颗粒度填料的性能表现出来 UPLC以小颗粒填料技术为基础，但是仅有小颗粒填料并不能构成UPLC系统 UPLC是一个综合的技术 色谱理论的回顾 van Deemter曲线及其方程式 1956年；J.J van Deemter介绍了他著名的方程式 最初该方程式主要用在气相色谱（GC）上 经过改进，该方程式用到了液相色谱上 Waters公司引入UPLC的概念由其著名的方程式开始…… van Deemter曲线及方程式 van Deemter曲线的提示 未来的色谱:更小的颗粒度 线速度与流速的换算 更小颗粒度所面临的挑战 色谱柱的性能 颗粒耐压及柱结构 颗粒度分布 系统的压力限 系统体积 检测的可行性 流动池的优化 检测的速度 系统控制及数据管理 ACQUITY?颗粒化学是什么？ 历史上最先进的颗粒技术 高效1.7μm颗粒，在硅胶基质内键合了桥式乙烷 改善了高pH稳定性 具有硅胶的柱效与反压 三官能团键合C18 配体 改善低pH稳定性 专利端基封口技术 最佳可能峰形 请记住： 如果不能获得良好峰形，则高柱效和峰容量是不可能的。 创造全新的颗粒技术 第一代杂化颗粒技术 我们当年采用的技术…1999年 第二代杂化颗粒技术桥式乙烷 － 硅碳杂化颗粒 创新及最优化的UPLC?柱 ACQUITY UPLC? 色谱柱化学 C18 三官能团键合 C18 专利的端基封口技术 宽 pH 范围 C8 三官能团键合 C8 专利的端基封口技术 宽 pH 范围 Shield RP18 双官能团键合 内嵌极性基团 Phenyl 三官能团键合 C6 Phenyl 专利的端基封口技术 ACQUITY UPLC? BEH 色谱柱化学 ACQUITY UPLC?系统通过设计实现超能 ACQUITY UPLCTM的特性 熟悉的分离机理 同样的色谱理论 应用领域扩展 为MS优化系统，可得到更多的信息 置信度更高的结果 支持先进的诊断技术，可靠性更高 提高生产力 更高的峰载荷量、更快的色谱 更高的实验室通量 从HPLC 到 UPLC 用ACQUITY 做 HPLC 用ACQUITY做HPLC 和 UPLCTM ACQUITY UPLCTM ACQUITY UPLCTM HPLC 和 UPLC 系统概貌 － 硬件部分 UPLC? 二元溶剂管理器 UPLC? 样品管理器 UPLC? 光学检测器 UPLC? 系统 二元溶剂管理器 低体积流路 串联/平行流路 四溶剂选择 A1，A2，B1，B2 UPLC?高耐压能力 用户诊断 二元溶剂管理器(BSM)的组成 低系统体积流路设计 回顾2695溶剂管理系统的创新设计 梯度流速的重现性 样品管理器 0.1~20μL进样范围 2×样品板固定器，每个可接受： 48×2mL样品瓶于Waters 样品瓶板中(标准配置) 另有多种配置 样品温度控制 从4~40oC 样品组织器 (样品管理器的选件) Sample Organizer(样品组织器) 扩展样品容量 1,060 x 2 mL 瓶 8,448 个样品 使用 384 孔板时