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UVRAG介导二烯丙基二硫诱导白血病K562细胞自噬硕士研究生：王萍指导老师：殷小成教授中文摘要目的研究UVRAG在二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病K562 细胞自噬中的作用，初步探讨DADS诱导K562细胞发生自噬的分子机制。方法1) 体外培养K562 细胞；不同浓度（10mg/L，20mg/L，40mg/L，80mg/L）DADS 作用K562细胞12h后，利用透射电子显微镜观察K562细胞的超微结构自噬体的形成；及40mg/LDADS作用不同时间（3h、6h、12h、24h）K562细胞后，采用吖啶橙染色，荧光显微镜观察自噬囊泡的形成以检测DADS 诱导K562 细胞自噬；2) 通过RT-PCR法从转录水平检测UVRAGmRNA在不同浓度（10mg/L，20mg/L，40mg/L，80mg/L）DADS 处理K562细胞12h 后的表达水平；3) 通过Western Blotting法从蛋白水平上检测在不同浓度(10mg/L，20 mg/L，40mg/L，80mg/L）DADS 处理K562细胞12h 后UVRAG蛋白表达水平。结果1) 不同浓度（10mg/L，20mg/L，40mg/L，80mg/L）DADS作用K562细胞12h后，透射电镜观察显示不同浓度DADS处理组可观察到胞质或胞核内出现具有双层膜结构的自噬小体，而空白组、溶媒组未观察到自噬小体。2) 40mg/LDADS处理K562细胞3h、6h、12h、24h 后，通过吖啶橙染色荧光显微镜下观察可见到DADS 处理不同时间（3h、6h、12h、24h）K562 细胞后，细胞胞浆中可呈现橙红色斑点状的酸性囊泡（即为自噬泡），随着时间的增加，细胞胞浆中的酸性囊泡有增多的趋势，其中40mg/LDADS处理K562细胞12h 后，细胞胞浆中的橙红色斑点状的酸性囊泡最明显，而给药24h 后细胞胞浆中的橙红色斑点状的酸性囊泡数量有所下降，可能与随着时间的延长，酸性囊泡被降5解有关。3）RT-PCR检测UVRAGmRNA表达水平结果显示，不同浓度(10mg/L，20 mg/L，40 mg/L，80 mg/L）DADS作用K562细胞12h 后，UVRAGmRNA 表达水平分别为0.621±0.025，0.671±0.019，0.812±0.009，0.738±0.044，而空白对照组为0.554±0.018，溶媒对照组为0.572±0.018，药物处理组UVRAG mRNA表达水平均高于对照组（差异具有统计学意义，P0.05），而对照组之间表达强度无明显差异（P0.05）。4）Western Blotting检测UVRAG蛋白表达水平结果显示，不同浓度（10 mg/L，20 mg/L，40 mg/L，80 mg/L）DADS作用K562细胞12h 后，UVRAG∕Actin 的灰度值分别为0.731±0.044、0.812±0.069、1.151±0.175、0.880±0.071，而空白对照组、溶媒对照组分别为0.293±0.072、0.251±0.031，药物处理组 UVRAG蛋白表达水平均高于对照组（差异具有统计学意义，P0.05），而对照组之间表达强度无明显差异（P0.05）。结论二烯丙基二硫可诱导白血病K562细胞自噬；其机制可能与UVRAG介导的自噬通路有关。关键词：二烯丙基二硫；UVRAG；K562细胞；自噬6DADSinduceautophagyoftheleukaemiak562cellmediatedbyUVRAGAbstractObjective:ToobservetheeffectofUVRAGonautophagy ofK562cellinduced by diallyldisulfide (DADS),andexplore the mechanismofautophagyinducedbyDADS inK562cells.Itwillsupplypotentialtargetsforthetreatmentofleukemia. Furthermore,itprovidessometheoreticalandexperimentalbasisforapplyingDADS into the leukemiatreatment in future.Methods:K562 cells were cultured in K562 cell culture systems. The ultrastructureofK562 cells treated with DADS (10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L) for12hourswasobservedbytransmissionelectionmicrosco