p物质对脑膜炎奈瑟菌抗原诱导小胶质细胞表达cox-2及分泌pge2影响及分子机制初探word论文.docxVIP

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2018-02-08 发布于上海
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p物质对脑膜炎奈瑟菌抗原诱导小胶质细胞表达cox-2及分泌pge2影响及分子机制初探word论文.docx

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p物质对脑膜炎奈瑟菌抗原诱导小胶质细胞表达cox-2及分泌pge2影响及分子机制初探word论文

PBSphosophate buffered saline磷酸盐缓冲液TAEtris/acetate/(buffer)Tris/乙酸电泳缓冲液TBSTris-buffered salineTris 缓冲盐溶液TEMEDN，N，N’，N’-tetramethylethylenediamineN，N，N′，N′-四甲基乙胺TrisTris-(hydroxymethyl) aminomethane三羟甲基氨基甲烷NOnitricoxide一氧化氮ILinterleukin白细胞介素TNFtumor necrosis factor肿瘤坏死因子IFNinterferon干扰素LPSlipopolysaccharides脂多糖EDTAethylenediaminetetraacetic acid乙二胺四乙酸IP3inositol 1，4，5-triphosphate三磷酸肌醇PCNAproliferatingCellNuclearAntigen增殖细胞核抗原cAMPcyclicAdenosinemonophosphate环磷酸腺苷Acadenylatecyclase腺苷酸环化酶TXB2thromboxane B2血栓烷B2ICAM-1intercellularadhesion molecule-1细胞间黏附分子-12P 物质对脑膜炎奈瑟菌抗原诱导小胶质细胞表达COX-2及分泌PGE2的影响及分子机制初探研究生：陈庆德指导教师：胡四海教授中文摘要目的观察P 物质对脑膜炎奈瑟菌抗原（Neisseriameningitidisantigen，NMA）诱导小胶质细胞（microglia，MG）表达环氧化酶2（Cyclooxygenase-2，COX-2）及产生前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的影响，并初步探讨其可能发生的作用机制。方法体外原代培养大鼠小胶质细胞，并根据不同的实验目的分为5 组：（1）空白对照组（仅给予等体积DMEM/F12 培养基）；（2）NMA处理组（加入10μg/ml 超声处理的粗抗原作用8h）；（3）单纯SP组（加入1 nmol/LSP作用8h）；（4）SP 组+NMA组：抗原刺激的同时加入1 nmol/LSP 作用8h；（5）SP受体拮抗剂组：小胶质细胞加入10nmol/LSP受体拮抗剂L-703,606 预处理15min。处理结束后，实时定量PCR检测COX-2 mRNA的表达，ELISA 检测PGE2产生，Western blot 分析核转录因子NF-κB p65 亚基的转位以及PGE2受体EP2 和EP4的表达。结果1.实时定量PCR结果显示，单纯SP 处理组或单纯NMA处理组COX-2 mRNA 表达水平均明显高于阴性对照组，分别为（0.24±0.061 VS 0.03±0.032, P0.05）和（0.32±0.042VS0.03±0.032,P0.05），而同时进行SP 和NMA共同孵育后，COX-2 mRNA水平显著高于NMA单独处理组（0.80±0.052 VS 0.32±0.042,P0.05）。此外，用SP受体拮抗剂L-703,606处理MG后，能降低SP对COX-23mRNA表达的协同作用（0.43±0.086 VS 0.80±0.052, P0.05）。2.ELISA 结果显示，单纯SP 能在一定程度上诱导MG 细胞产生PGE2，[(24.35±4.27)pg/mLVS(18.45±3.31)pg/mL,P0.05]，单纯NMA能诱导MG细胞分泌PGE2水平明显增高[（47.52±10.34）pg/mLVS(18.45±3.31)pg/mL, P0.05）]；NMA和SP共同孵育后，PGE2分泌水平较NMA对照组显著增高[（126.47±14.68）pg/mL,P0.05）。而L-703,606 预处理后，PGE2分泌水平较SP＋NMA组明显降低[（59.61±5.52）pg/mL, P0.05]。3.Westernblot结果显示，NMA刺激MG后，NF-κBp65 亚基转位进入细胞核水平较阴性对照组明显增高（P0.05）。而NMA与SP 联合作用后，细胞核中p65水平较NMA对照组显著增高（P0.05）。SP受体拮抗剂L-703,606 预处理能降低SP＋NMA诱导的p65 转位（P0.05）。4.单纯NMA或SP处理组对PGE2受体EP2、EP4表达水平无明显影响（P0.05）。而NMA联合SP 处理4h 后，EP2 和EP4 受体表达水平显著增高（P0.05）。L-703,606 预处理后，SP＋NMA 诱导的EP2 和EP4 表达水平明显降低（P0.05）。结论1．SP 能协同NMA诱导MG表达COX-2mRNA和分泌PGE2增加，并能促进前列腺素受体EP2