mir-145对hepg2干细胞增殖的影响word论文.docxVIP

miR-145 对 HepG2 干细胞增殖的影响中文摘要 研究生：何涛 导师：李国庆目的：肝癌发生发展是多因素、多步骤综合作用的结果，它是一个复杂的多基因疾 病已成为共识。而作为目前生命科学研究热点的 microRNA(miRNA)，由于其在肝癌 发生中具有癌基因及抑癌基因的双重作用，亦受到广泛关注。既往研究表明，miR-145 是一种潜在的肝癌“保护性”miRNA，本研究旨在探讨 HepG2 细胞中 miR-145 与肝 癌干细胞之间的关系及可能的分子机制，以阐明 miRNA 调控细胞增殖的可能作用机 制，揭示肝癌细胞生长的规律，为肝癌的治疗探索一条新的思路。方法：（1）按常规培养方法，体外培养 HepG2 细胞，选取处于对数生长期的细胞为实验细 胞，接种于细胞培养板或培养瓶中，待细胞均贴壁完全后，弃去废弃培养液。（2）分别以 siRNA-NC-FAM 和 shRNA-GFP 为转染物，以脂质体 Lipofectamine 2000为转染试剂，倒置荧光显微镜下观察转染效率，进行转染效率评价。（3）本实验拟分为以下四组，分别为：miR-145 模拟物转染组，模拟物阴性对照转 染组，只加转染试剂的对照组以及不做任何处理的空白对照组，根据人源 miR-145-5p 的基因序列,设计并合成双链模拟物（miR-145-5p mimics）。将 miR-145-5p mimics 以 脂质体 Lipofectamine 2000 包裹，并转染至 HepG2 细胞株中。（4）实时定量 PCR 法检测 miR-145-5p 的表达水平。（5）转染后 48 小时，Western blot 方法检测细胞内目标基因 OCT4 蛋白表达水平。（6）细胞增殖实验 CCK-8 法检测 miR-145-5p 对 HepG2 细胞株在不同时间段(24 小 时、48 小时、72 小时)生长的作用。（7）实时定量 PCR 检测干细胞标志物 CD90 mRNA 表达的变化。结果：2（1）用中剂量的 siRNA oligo 转染 HepG2 细胞效果较好；（2）与各实验对照组相比，miR-145-5p 模拟物转染组的 miR-145 表达明显上调；（3）过表达 miR-145 抑制 HepG2 细胞生长；（4）转染后 48 小时模拟物转染组过表达的 miR-145 可明显降低 OCT4 蛋白水平及干 细胞标志物 CD90 mRNA 的表达。结论：miR-145 可能通过下调 OCT4 基因表达抑制 HepG2 干细胞的增殖，是一种潜 在的肝癌保护性 miRNA。关键词：miR-145；肝癌；OCT4 基因；干细胞3The impact of miR - 145 on the proliferation of HepG2 cells AbstractObjective: Occurrence and development of hepatocellular carcinoma development is a result of multi-factor and multi-step synthesis. There has reached a consensus that it is a complex polygenetic disease. Micrornas (miRNA), a present research hotspot in life science, has attracted extensive attention for it can serve a dual function of prompting and inhibiting cancer gene in development of hepatocellular carcinoma. Previous studies showed that miR-145 is a kind of potential liver cancer protective miRNA, this study aims to explore miR-145 in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells, its relationship with liver cancer stem cells and the possible molecular mechanism, to clarify the possible action mechanism of miRNA in regulation of cell proliferation, to reveal the rule of liver cancer cell growth, to explore a