第四章+色谱法定.ppt

下一内容 回主目录 返回 第四章 第一节 色谱法概述 色谱法亦称色层分析法、层析法等，是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用。 第一节 色谱法概述 一、色谱法的特点 色谱法共同的基本特点是具备两个相： 固定相：固定不动的一相称为固定相； 流动相：携带试样样品流过固定相的流体称为流动相。 二、色谱法的分类 二、色谱法的分类 第一节 色谱法概述 二、色谱法的分类 两相状态 流动相 的物态 液相色谱 （LC） 气相色谱 （GC） 液－固色谱 液－液色谱 气－固色谱 气－液色谱 超临界流体色谱（SFC ） 第一节 色谱法概述 四、色谱法的特点 (1) 分离效率高 (2) 灵敏度高 (3) 分析速度快 (4) 应用范围广 第二节 几种常用的色谱法 、薄层色谱（TLC） 薄层层析是将吸附剂或者支持剂均匀 地铺在一块玻璃上，形成薄层。把欲分离 的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展 开，使混合物得以分离的方法。 第二节 几种常用的色谱法 、薄层色谱：（TLC） ? 原理： 薄层色谱法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃板上制成薄层板，把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开。试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。从而使试样中的不同组分上升的距离不同而形成 彼此分开的斑点。 ? 吸附薄层主要是利用吸附 剂对样品中各成分吸附能力 不同，及展开剂对它们的解 吸能力的不同，使各成分达 到分离。 第二节 几种常用的色谱法 、薄层色谱：（TLC） ? 操作方法： 1、薄层板的制备 （1）玻璃板，洗净，烘干。 （2）调糊：1份薄层层析硅胶和3份羧甲基纤维素钠水溶液在研钵中调成 无颗粒、无气泡、粒度均匀的糊状。 （3）将调成的糊状物用小勺取适量倒在玻璃板上，粗铺平，手指轻弹玻 璃板，使糊状物均匀地铺在玻片上，然后于室温下晾干。 （4）活化：将晾干的薄层板放在105-110℃的烘箱中活化0.5h。活化好 的薄板应保存在干燥器中备用。 注：制成的薄层板厚薄均匀，无颗粒、无气泡。板的好坏决定分离效果。 第二节 几种常用的色谱法 、薄层色谱：（TLC） ? 操作步骤： 2、点样 （1）样品的溶解 （2）毛细管点样 用一支管口平整的毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上，样点距底边1-2cm， 样点直径一般不超过3mm。多个点时，应处于同一直线上，样点间距以互不影响 分离为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。若溶液太稀或样点太小，待溶剂挥 发后可在同一样点上反复点样，且样点中心应重合。正常斑点以圆形，直径较小 为宜。 第二节 几种常用的色谱法 、薄层色谱：（TLC） ? 操作步骤： 3、展开： 展开剂选择 展开方法——上行法:在缸中加入足够量的展开剂，将点好样的薄层板 放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切 勿将样点浸入展开剂中）,密封缸盖,待展开前沿离薄板上端1cm时，取出薄 层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。一般情况，先在薄片另一端1cm处 画一条直线，展开剂达到此线时，立即取出。 第二节 几种常用的色谱法 、薄层色谱：（TLC） ? 操作步骤： 4、显色： 光学检测；碘蒸气显色；试剂显色。 5、计算Rf值 ： 第二节 几种常用的色谱法 二、柱色谱 ? 基本操作： 1、装柱： 装柱要求：柱子装的要均匀，不能有断层、裂缝，不能 有气泡等，否则要重新装柱。 装柱方法：湿法装柱和干法装柱。 第二节 几种常用的色谱法 湿法装柱：把柱竖直固定好，关闭下端活塞，底部用少量脱脂棉轻轻塞紧，再在 脱脂棉上盖上一层石英砂，然后向柱中加入洗脱剂至柱体积的1/4。 将一定量洗 脱剂与的吸附剂在烧杯内调成糊状，将糊状物倒入柱中，打开柱下端的活塞使溶 剂慢慢流出，并不断敲击柱身，使吸附剂渐渐沉于柱底。注：务必使吸附剂装填 均匀，不能有气泡和裂隙，还必须有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。 干法装柱：先在柱底塞上少许脱脂棉，再加入一些细粒石英砂，将干燥吸附剂， 经漏斗均匀地成一细流慢慢装入柱中，边加入边敲击柱身，务必使吸附剂装填 均匀，不能有空隙，吸附剂装填完毕后可在吸附剂上覆盖少许石英砂。 注：吸附剂用量，一般为被分离物质的量的30~50倍。如果被分离组分性质相 接近，吸附剂用量要更大些，甚至达到至100倍。 第