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第三章 cDNA文库和基因组文库
第三章 cDNA文库和基因组文库
第一节 cDNA文库的建立与基因的分离
第二节 基因组文库的建立与基因的分离;
来源
大小
应用;第一节 cDNA文库的建立与基因的分离;
利用oligo（dT）引物和反转录酶合成cDNA第一链;
自身引导法合成双链cDNA;
双链cDNA的置换合成;
同聚物加尾法克隆双链cDNA;
通过依次加入、连接
合成的DNA衔接物
进行cDNA克隆;
用衔接物分子连接平末端的DNA片段;衔接物（linker）
指用化学方法合成的一段由10-12个核苷酸组成，具
有一个或数个限制酶识别为点的平末端寡核苷酸短
片段
缺点：
酶切可能切断cDNA
对策：
利用切点稀少的限制酶
甲基化;接头（adapter）
是一类人工合成的一头具有某种限制酶粘性末端，
另一头为平末端的特殊的寡核苷酸片段。
可能问题：
接头自身连接
解决方法：
接头分子一端磷酸化;
具异常的5’-OH粘性末端结构的BamHⅠ接头的连接机理;第二节 基因组文库的建立与基因的分离;
构建真核DNA随机片段文库的策略;
不经分级分离的基因组DNA文库的构建;优点：
①载体不互补，抑制自身连接
②基因组DNA不互补，稍短的片段极不可能连接成带有原基因组上非相邻DNA区段的结构
;
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