第七章xin 生物样品内中药制剂化学成分的测定2.ppt

第七章生物样品内中药制剂化学成分的测定 pyh 第一节 概 述 一、生物样品内药物分析的性质、意义和任务 生物样品内药物分析： （体液药物分析、生物药物分析） 通过各种分析手段，了解药物在生物样品内的数量和质量变化，获得药物代谢动力学的各种参数、药物在生物样品内的生物转化、代谢的方式和途径等信息，为药品生产、临床医疗、实验研究等方面对药物的研究作出估计与评价 意义： 新药评价和新药开发 临床合理用药 兴奋剂、法医毒物分析 微量药物 及其代谢 物的分离 分析 任务： 1、分析方法学的研究 2、生物样品内中药成分研究 3、生物样品内内源性物质的测定和研究 二、生物样品内药物分析的对象与特点 第二节 药物在生物体内的存在状态与生物转化 存在状态： 1. 药物在与生物大分子蛋白质结合 2.化学成分间的相互作用 药物代谢： 1、氧化、还原和水解反应 2、结合反应 （葡萄糖醛酸、硫酸盐等） 第三节 生物样品的制备 一、样品的采集和保存 血液（血浆、血清、全血）（药动、生物利用 度、药浓监测） 尿液（药物剂量回收、肾清除率、代谢类型等） 唾液 （药浓监测及药代动力学） 组织 要求 根据实验目的选取样品类型 样品具有代表性 取样后最好立即进行分析 血样贮存 冰箱 尿样贮存 冰箱冷藏或加防腐剂（氯仿、甲苯） 组织性样品 －20℃速冻 避免污染 四、样品的预处理 （一）蛋白质的去除 脱水沉淀 中性盐 （硫酸铵、硫酸钠） 加入与水混溶的有机溶剂 （ 乙腈、甲醇、 乙醇、丙酮） 形成不溶性盐沉淀 酸 （三氯醋酸、高氯酸、磷酸） 重金属离子 （铜盐、汞盐） 酶水解、加热使沉淀或超滤、透析除蛋白 （二）净化与富集 1.液-液萃取法 2.固相萃取法 3.固相微萃取法 （三）结合物或缀合物水解 使待测成分从结合物或缀合物中游离出来 待测成分 以葡萄糖醛酸苷或硫酸酯类结合或 代谢产物 酸水解：无机酸 酶水解：枯草溶菌蛋白酶 蛋白 缀合 Β－葡萄糖醛酸酶 芳基硫酸酯酶 溶剂解：主要是硫酸酯，随加入的萃取溶剂分解 （三）冷冻干燥 第四节 生物样品药物分析方法 分析方法的设计： 了解药物的性质与生物样品内状况 分析方法的建立： 纯品 线型范围、测定浓度、灵敏度、最适条件 空白溶剂 灵敏度、专属性 空白生物基质 考察内源性物质干扰 模拟生物基质 线性、范围、提取回收率、最低监测 浓度（灵敏度）、精密度、准确度 实际生物样品 验证可行性 方法评价： 精密度 高、中、低三个浓度 每个测5－7次 RSD≤ ±15％ 准确度 高、中、低三个浓度 每个测5次 提取回收率 50%-80% 方法回收率 ≤ ±15％ 灵敏度 LOD LOQ 专属性（选择性） 代谢物、内源性物质、共 存药物 6个个体空白样 可测浓度范围 r≥ 0.99 稳定性 长期、短期、冷冻－解冻、储备液 提取回收率 质量控制 五、测定方法 光谱法：紫外－可见分光光度法 荧光分光光度法 色谱法：气相色谱法 高效液相色谱法 联用技术 免疫分析法 主要内容及要求 掌握生物样品的种类及采集 熟悉蛋白质去除的方法及常用体内药分的方法 习 题 血样包括哪几种（ ） 血浆、全血、血色素 血浆、全血、血清 全血、血清、血色素 血清、白蛋白、全血 B 生物样品中药物的提取，对于碱性药物的最佳PH值应高于其Pka值几个单位（ ） 3 4 1～2 2 C 生物样品的提取回收率不得低于 70％ 6