绿茶提取物EGCG对牙龈卟啉单胞菌体外抑菌作用的研究.docVIP

精品论文 参考文献 绿茶提取物EGCG对牙龈卟啉单胞菌体外抑菌作用的研究 黄彬　陈黄琴（湖北科技学院口腔教研室　咸宁湖北　437100） 慢性牙周炎是由微生物感染引起的牙周组织的慢性炎症性疾病，是成年人缺牙的主要原因。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingiva1，P.gingiva1，Pg)是牙周病、尤其是成人慢性牙周炎病变区域活动部位最主要的优势菌。牙龈卟啉单胞菌的存在与牙周炎在治疗后复发或病情继续加重有关[1]。目前，牙周炎的治疗主要还是以药物治疗最为常用，而临床常用的药物均属化学合成药，其用药时程长，副作用大，长期应用还可破坏口腔生态平衡，且易使细菌产生耐药性，影响治疗效果。因此，在中药或天然物质中寻找新的控制牙周病菌的药物，是近年来的研究重点。茶叶作为一种传统的医食同源保健饮料，在我国已有5,000年的历史。它具有抗炎、防癌、延缓衰老、改善血循环等多种功能。茶叶还能抑制致龋菌-变形链球菌合成不溶性葡聚糖，起到良好的防龋作用。茶多酚是绿茶的提取物，包括epigallocatechin-3-gallate (EGCG)，(-)-epicatechin-3-gallate (ECG)，(-)-epigaUocatechin (EGC)，和epicatechin (EC)，其中EGCG是主要的活性化合物。本实验的目的就是探讨绿茶提取物EGCG对牙龈卟啉单胞菌的体外抑菌作用，为牙周病的防治提供实验依据。 1　材料与方法 1.1 实验药物：EGCG购自Sigma公司，纯度98%。 1.2 实验菌株：牙龈卟啉单胞菌（Pg）ATCC3327由武汉大学口腔生物医学教育部重点实验室提供。 1.3 培养基：液体培养基：采用牛心脑浸液培养基(BHI培养基)，高压灭菌20min后备用。使用时添加Vitkl—Hemin液(1％)。固体培养基：采用BHI培养基添加琼脂(2g/m1)，高压灭菌20min后冷却备用。使用时加入脱纤维蛋白血(5％-10％)即成BHI血琼脂培养基，倾注使用。 1.4 菌液的制备：菌冻干株经复苏、传代和增菌，形态学检查及生化鉴定为纯培养后，再以半径7.5 cm的离心机3000 r/min 离心5 min，收集细菌。采用麦氏比浊法用BHI液体培养基配成细菌混悬液(1times;105CFU／m1)备用。 1.5 MIC和MBC的测定：采用微量液体稀释法，用液体培养基将EGCG稀释成系列半数递减的试验药物质量浓??，将稀释后不同浓度是EGCG100mu;l加入到96孔板中，再加入1times;105CFU／m1 菌液100mu;l，体积分数80％N2、10％H2、l0％CO2，37℃厌氧培养48 h后，肉眼观察无细菌生长，即试管内液体清亮无混浊或沉淀生长的最低药物质量浓度记为EGCG的最低抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)[2]。设置阳性对照(对照孔中不加试验药物，只加入1times;105CFU／m1的菌悬液和等量的BHI)和阴性对照(对照孔中不加试验菌悬液，只加等量的EGCG液和BHI)。挑取MIC液体划线接种于BHI血琼脂平板，37℃厌氧培养48h，无细菌生长时的实验药物为最低杀菌质量浓度 (minimum bactericidal mass concentration，MBC)[2]。 2　结果 EGCG的MIC和MBC 分别为0.25mg/ml和1mg/ml。 3　讨论 牙龈卟啉单胞菌在慢性牙周炎、侵袭性牙周炎、牙周脓肿、牙髓感染等口腔疾病的发生发展过程中发挥着重要的作用。牙龈卟啉单胞菌的检出率与牙周探诊深度、临床附着丧失和牙龈指数等牙周临床指数呈正相关关系[3]。故Pg被认为是成人牙周炎的主要可疑病原菌。自1890年W.D.Miller提出细菌感染是牙周病的病因，并建议用抗菌剂来治疗或减少菌斑以来，关于牙周病的药物治疗已有很大的发展。针对牙周致病菌的药物及其制剂越来越多。研究表明，绿茶提取物茶多酚具有较强的抗菌消炎作用，可抑制口腔中变形链球菌、粘性放线菌、唾液链球菌等多种细菌的生长[4]，临界抑菌浓度为0.25％～0.55％，浓度增加，抑菌效果也增强。EGCG是绿茶提取物茶多酚的主要活性成分，纯度更高，抗菌效果更显著。本研究通过微量液体稀释法测定了绿茶提取物EGCG对牙周主要致病菌-牙龈卟啉菌的体外抑菌活性，进而初步探讨了EGCG的辅助局部药物治疗效果。结果显示，EGCG的MIC和MBC 分别为0.25mg/ml和1mg/ml，即EGCG在较低的质量浓度时对致病菌产生抑制