希夫碱配合物的合成、表征及抗肿瘤活性的研究(可编辑).doc

希夫碱配合物的合成、表征及抗肿瘤活性的研究 中国海洋大学 博士学位论文 希夫碱配合物的合成、表征及抗肿瘤活性研究 姓名:张霞 申请学位级别:博士 专业:海洋化学工程与技术 指导教师:毕彩丰;范玉华夫碱配合物的合成、表征及抗肿瘤活性研究 于葡婴 希夫碱及其金属配合物被证明具有抗癌、抑菌、与相互作用等生物 活性,引起了科学界的广泛关注。近几年来,有关希夫碱金属配合物抗肿瘤活性 的研究有一定的报道,但是关于希夫碱金属配合物抑制蛋白酶体活性及诱导肿瘤 细胞凋亡的机理方面的研究鲜有报道。泛素.蛋白酶体通路. ,切在肿瘤治疗中的作用引起广泛关注。泛素.蛋白酶体通路是真核细 胞蛋白质降解的重要途径。特异性阻断通路,可以显著的影响许多负责细 胞周期和肿瘤生长的蛋白,如细胞周期蛋白、、、.等的降解,继而影 响到多个细胞内过程,从而导致细胞凋亡。因此,蛋白酶体抑制剂则是一类很有 希望的抗肿瘤活性化合物,成为肿瘤治疗的新靶点。 本论文正是在蛋白酶体抑制剂研究的基础,合成了一系列希夫碱及其金属配 染色法筛选出几种抗 合物,对其进行了表征,用法及台盼兰 肿瘤性能良好的铜、锌配合物,对这些高活性化合物的抗肿瘤机制进行了深入研 究,确定了该类希夫碱配合物的生物靶标为蛋白酶体。具体内容如下: 合成了种牛磺酸氨基酸希夫碱金属配合物,探讨其对蛋白酶体 的抑制作用,结果表明大部分铜配合物均可抑制蛋白酶体的活性,法 ● ● 筛选出对肿瘤细胞增殖具有较好抑制能力的配合物.牛磺酸缩水杨醛铜邻菲咯啉 的三元配合物,考察了对纯化的蛋白酶体的抑制作用,结果表明 其对纯化的蛋白酶体的抑制作用呈浓度依赖方式,半抑制率约为 ; 作用于人乳腺癌细胞.一的实验表明,此配合物以浓度及时间依赖 方式抑制人乳腺癌细胞..内蛋白酶体的活性进而诱导细胞凋亡; 作用于白血病细胞 ,台盼兰染色法表明此配合物对白血病细胞的致死率 呈浓度依赖方式,且以浓度及时间依赖方式抑制白血病细胞内蛋白酶体 的活性进而诱导细胞凋亡。对人乳腺癌细胞..及白血病细胞 的蛋白酶体诱导能力及凋亡诱导方式相似,证明了其抗肿瘤广谱性。 合成了,.二溴酪氨酸希夫碱配体及其它的种配合物,运 用元素分析、红外光谱、紫外光谱、摩尔电导率及热分析等手段,对合成的配体 和配合物进行了表征。各配合物的组成分别为?、‘、‘、、】。。 对部分配合物进行了非等温热分解动力学研究,得出了配合物某步热分解的 反应机理、热分解动力学方程、相应的动力学参数及活化熵△妒和活化吉布斯函 数△伊,结果如下: 】?第步一热分解动力学函数为: /.仅【.~,热分解动力学月怔为:/?。/./?/ /,.,,.,△名一./‘, 一一一仅】~,. /。 △≠. 】?的第步热分解动力学函数为: ./...】~,热分解动力学方程为:/?。肌’?坟/?正馏’ /,.,,..,△名. /?, 一一一仅,. △伊.. /。 的第 步热分解动力学函数为: 】? //一一一一,热分解动力学方程为:/?蜘一; /,.,,.,△萨.. /.仅.?【■?。肌,. /?,△伊.. /。 . ● : 对配体和部分配合物的荧光特性进行了研究。配体的激发和发射峰 沁列№ / , 、 为配合物 ?、 】.的激发和发射峰沁/分别为 / 、/ /、/,与配体相比较,【 】?配合物形成后,荧光强度、激发光谱和发射光谱的位置均产生了 变化,尤其是荧光强度发生了明显的变化;.、 .配合物的荧光强度、激发光谱和发射光谱的位置均未产生大的变化,荧 光性质与配体较相似。 利用合成的,.二溴酪氨酸希夫碱配体及其铜配合物 】?为研究对象,考察了其对人乳腺癌细胞 ..内蛋白酶体活性抑制及凋亡诱导作用。结果表明,此铜配合物可 以通过抑制蛋白酶体的活性诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡机理与牛磺酸希夫碱铜配合 物相似。 合成了邻苯二胺缩邻香草醛希夫碱配体及邻苯二胺缩水杨醛希夫 碱配体,?分别将、溶液与铜盐或锌盐溶液混合得到几种配合物混合溶 液。分别用各混合物溶液处理人乳腺癌细胞.一及白血病细胞 ,详细考察了其对两种肿瘤细胞的蛋白酶体抑制作用及细胞凋亡的诱导作用。 结果表明:、.混合液均能通过抑制蛋白酶体的活性进而诱导肿瘤细 胞凋亡,混合液的作用能力较混合液稍强,但是二者对两种肿瘤细 胞的凋亡诱导机理相似,都是钙蛋白酶参与的结果,这与及配合物诱导 细胞凋亡机理不同。同时比较了不同结构的配体、形成的铜混合液对白血 病细胞 的蛋白酶体活性抑制能力及细胞凋亡的诱导能力,探讨了配体结 构对配位能力的影响。 比较了和对纯化的蛋白酶体的抑制作用。结果表明: 两种价态的铜均可抑制蛋白酶体的活性,但较抑制作用稍强;纯化 的蛋白酶体将《还原为;和乙醇等羟基自由基抑制剂部 分的保护纯化的蛋白