无菌检查法试验具体操作方法 课件.ppt

无菌试验具体操作方法 实际应用及注意事项 分类 一、概述 无菌检查法系用于确定要求无菌的生物制品、原料、辅料及要求无菌的其他品种是否无菌的一种办法。 若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查在生产检定中是很重要的一个检项，如果出现差错会有很大的隐患，近年注册申报资料中无菌检查法验证的内容确实在日渐完整和规范。 2005年版《中国药典》无菌检查法增加了方法验证的内容，增加了试验的可操作性，方法更具有科学性，提高检出率。保证检验结果的准确性。 二、试验物品准备 1、培养基数量及选用： 首先要确认本次试验供试品所需培养基的数量。 在此基础，要多加一套相同的培养基做阴性对照。 合格的培养基应保存在2-25℃并防止被污染, 使用期限不得超过3周. 无菌试验对培养基的质量要求高，应选用完全透明无沉淀的培养基，确认检查合格后放入试管架中，置操作间，方可使用。 二、试验物品准备 二、试验物品准备： 2、灭菌物品的确认： 高压根据试验要求，准备所需器材和物品。需在灭菌物品盒标注名称，并填写灭菌日期，清点无误后将其送至灭菌前间。 灭菌是无菌物品生产的重要环节，根据物品的性能选择合适的灭菌方式，是确保试验质量的关键。 我们通常把玻璃器皿包括吸管瓶子选择180℃2小时干热灭菌，胶栓121℃60分钟灭菌，取回灭菌物品时，一定要在有效期内使用，试验前确认指示剂是否合格及包装的完整性，干燥性，合格后方可使用。 二、试验物品准备： 物品摆放整齐的准备间： 二、试验物品准备： 工作人员在控制高压温度： 三、无菌操作要求及注意事项 环境 三、无菌操作要求及注意事项 三、无菌操作要求及注意事项 3.无菌操作室每天都要用0.1%的新洁尔灭或来苏水清洁剂，清洁―次(抹布要专用).紫外线照射消毒30-50min； 超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。在工作台面消毒时切勿将供试品和培养用液同时照射紫外线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置，否则会遮挡紫外线，降低消毒效果。 三、无菌操作要求及注意事项 人员： 无菌试验操作进入万级操作间时，操作人员必须着装整齐，穿好已灭菌的三更服装。 需带两层口罩，一层是白纱布，最后一层随三更服已灭菌的口罩。 方可进入无菌室进行操作 。 三、无菌操作要求及注意事项 操作 三、无菌操作要求及注意事项 三、无菌操作要求及注意事项 操作 1.在开试验前要制定好实验计划和操作程序。 有关数据的计算要事先做好。 准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。 这可以避免开始实验后，因物品不全，往返拿取而增加污染机会。 三、无菌操作要求及注意事项 2.在无菌环境进行试验时，操作人员要确定好自己所工作的位置，操作前戴手套，酒精棉进行消毒。 3.点燃煤气灯后。用火焰先把试管架上的培养基胶栓与试管口处烧灼一下，以后一切操作，如打开或封闭瓶口时，都需在火焰近处并经过烧灼进行。 但要注意：金属器械不能在火焰中烧的时间过长，烧过的金属镊要待冷却后方可使用。 三、无菌操作要求及注意事项 4.吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入培养基中。 开启、关闭供试品时，火焰灭菌时间要短，防止因温度过高灭活供试品。 另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害供试品。 5.进行试验时，吸管抽取供试品后，要与培养基试管平行且垂直，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。 三、无菌操作要求及注意事项 6.吸取营养液、 氯化钠等及各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致交叉污染。手或拿取物品时不能经过打开的瓶口上方，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管废弃。 7.不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。工作由始至终要保持一定顺序性。供试品在未使用之前，用煤气灯先把试管架上的培养基胶栓及试管口处烧灼一下，勿过早暴露在空气中。同样，培养基在未用前，不要过早开栓 用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。 四、具体检测方法 四、具体检测方法 四、具体检测方法 无菌试验样品取样标准： 1.原液及半成品： 抽检量应至少为0.1%，但不得少于10ml，如原液及半成品除菌过滤后，分别于多个容器内，则每个容器抽检量不得少于10ml，原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽检。 四、具体检测方法 无菌试验样品取样标准： 2.成品： 每亚批均应进行无菌检查